[发明专利]一种抗高温胁迫的重组耻垢分枝杆菌的构建方法在审
| 申请号： | 201810774899.0 | 申请日： | 2018-07-13 |
| 公开（公告）号： | CN109022337A | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 周盈;魏文静;张晓莉;王绪德;周亚凤;刘芳;毕利军 | 申请（专利权）人： | 佛山科学技术学院 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/74;C12N15/11;C12R1/34 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 王国标 |
| 地址： | 528000 广*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组耻垢分枝杆菌 耻垢分枝杆菌 抗高温 胁迫 基因片段 构建 分子生物学研究 结核分枝杆菌 微生物反应器 表达体系 分枝杆菌 抗结核 启动子 宿主菌 新疫苗 研发 引物 蛋白 参考 基因 生长 | ||
1.一种抗高温胁迫的重组耻垢分枝杆菌的构建方法，其特征在于包括：导入HtpG基因片段，使其重组耻垢分枝杆菌具有表达HtpG蛋白的功能。
2.根据权利要求1所述的一种抗高温胁迫的重组耻垢分枝杆菌的构建方法，其特征在于所述HtpG基因片段如下a)或b)序列：
a)序列表中的SEQ ID №.1所示的核苷酸序列；
b)将序列表中的SEQ ID №.1的核苷酸序列经过一个或几个核苷酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与SEQ ID №.1所示具有相同功能及其衍生的基因片段。
3.根据权利要求1所述的一种抗高温胁迫的重组耻垢分枝杆菌的构建方法，其特征在于包括如下操作步骤：
制备耻垢分枝杆菌感受态，加入HtpG表达质粒进行电转入，获得能表达HtpG蛋白的重组耻垢分枝杆菌。
4.根据权利要求3所述的一种抗高温胁迫的重组耻垢分枝杆菌的构建方法，其特征在于：所述电转入的电转化仪器参数为2.5kv、25μF、1000Ω。
5.根据权利要求3所述的一种抗高温胁迫的重组耻垢分枝杆菌的构建方法，其特征在于所述HtpG表达质粒的获取方法如下：
1)以结核分枝杆菌的基因组DNA为模板，通过如序列表中的SEQ ID №.2所示的正向引物和如序列表中的SEQ ID №.3所示的反向引物进行PCR扩增，获得HtpG基因片段；
2)通过EcoRⅠ、HindⅢ和T4连接酶将步骤1)所得HtpG基因片段连到pMV261载体，获得HtpG表达质粒pMV261-HtpG。
6.一种抗高温胁迫的重组耻垢分枝杆菌，其特征在于由权利要求1～5任一项所述的构建方法获得。
7.一种用于结核分枝杆菌HtpG基因片段PCR扩增的引物对，其特征在于：该引物对序列如序列表中的SEQ ID №.2和SEQ ID №.3所示。
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