[发明专利]腐蚀稳定性色谱分析用配体

权利要求书

1.一种碱稳定性色谱分析用配体，所述配体包含两个或更多个葡萄球菌A蛋白(SpA)或其功能性片段或变体的B结构域或者两个或更多个SpA或其功能性片段或变体的Z结构域。

2.一种碱稳定性色谱分析用配体，所述配体包含两个或更多个葡萄球菌A蛋白(SpA)或其功能性片段或变体的B结构域或者两个或更多个SpA或其功能性片段或变体的Z结构域，其中所述两个或更多个B结构域或者两个或更多个Z结构域在色谱分析树脂的多于一个位点上附着于树脂。

3.权利要求1或者权利要求2的碱稳定性色谱分析用配体，其中所述配体包含三个或更多个SpA B结构域或者三个或更多个SpA Z结构域。

4.权利要求1或者权利要求2的碱稳定性色谱分析用配体，其中所述配体包含四个或更多个SpA B结构域或者四个或更多个SpA Z结构域。

5.权利要求1或者权利要求2的碱稳定性色谱分析用配体，其中所述配体包含五个或更多个SpA B结构域或者五个或更多个SpA Z结构域。

6.权利要求1或者权利要求2的碱稳定性色谱分析用配体，其中所述配体包含六个或更多个SpA B结构域或者六个或更多个SpA Z结构域。

7.权利要求1或者权利要求2的碱稳定性色谱分析用配体，其中所述配体包含七个或更多个SpA B结构域或者七个或更多个SpA Z结构域。

8.前述权利要求任一项的碱稳定性色谱分析用配体，进一步包括至少一个氨基酸的突变以改变与Fab的结合。

9.权利要求8的碱稳定性色谱分析用配体，其中所述突变包括在第29位丙氨酸取代甘氨酸。

10.一种色谱分析基质，包含权利要求1－9任一项所述的配体。

11.一种从样品中亲和纯化一种或多种免疫球蛋白的方法，所述方法包括如下步骤：

(a)提供含有一种或多种免疫球蛋白的样品；

(b)在一种或多种免疫球蛋白同基质结合的条件下，将样品与权利要求10的基质接触；和

(c)通过在适宜的条件下洗脱而回收一种或多种结合的免疫球蛋白。

12.权利要求1－9任一项所述的配体，其中所述配体在0.5M NaOH中温育5小时后，或10小时后，或15小时后，或20小时后，保留其至少95％的结合能力。

13.权利要求1－9任一项所述的配体，其中所述配体与wtSpA相比能够结合至少1.5倍，或2倍，或3倍，或更多的IgG。

14.一种碱稳定性色谱分析用配体，包含一个或多个分离的葡萄球菌A蛋白E、D、A、B、C或Z结构域，所述一个或多个分离的结构域包含位于n+1位的一个或多个突变为除半胱氨酸(C)、丝氨酸(S)、丙氨酸(A)、甘氨酸(G)、天冬酰胺(N)、或谷氨酰胺(Q)之外的任何天然存在的氨基酸的氨基酸残基，其中所述n代表天冬酰胺。

15.一种碱稳定性色谱分析用配体，包含一个或多个分离的葡萄球菌A蛋白E、D、A、B、C或Z结构域，所述一个或多个分离的结构域包含位于n+1位的一个或多个突变为选自精氨酸(R)、天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)、组氨酸(H)、异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、赖氨酸(K)、甲硫氨酸(M)、苯丙氨酸(F)、脯氨酸(P)、苏氨酸(T)、色氨酸(W)、酪氨酸(Y)和缬氨酸(V)组成的组中的氨基酸的氨基酸残基，其中n代表天冬酰胺。

16.权利要求14或15所述的配体，其中n是第23位的天冬酰胺。