[发明专利]腐蚀稳定性色谱分析用配体

说明书

本发明涉及具有提高的腐蚀稳定性的色谱分析用配体，如，基于免疫球蛋白结合蛋白的配体，如，葡萄球菌A蛋白，以及制备和使用所述配体的方法。

本申请是申请日为2009年12月23日的第201310478275.1号发明名称为“腐蚀稳定性色谱分析用配体”的中国专利申请的分案申请。

相关申请

本申请要求申请号为No.61/203,664，申请日为2008年12月24日的美国临时专利申请的优先权，其全部内容在此全部并入本申请。

技术领域

本发明涉及具有提高的腐蚀稳定性的色谱分析用配体，例如，基于免疫球蛋白结合蛋白(如，葡萄球菌A蛋白)的配体，以及包含此类配体的色谱分析基质。

背景技术

在亲和色谱分析中使用的配体通常赋予对靶分子的高选择性，因此导致了对靶分子的高收率以及快速而经济的纯化。基于葡萄球菌A蛋白(SpA)的试剂以及色谱分析基质达到了在捕获和纯化抗体的亲和色谱分析中的广泛应用，并且由于其结合IgG而对免疫球蛋白和抗体的亲和性没有显著影响的能力，其同样广泛应用于抗体检测方法。

据此，已经开发了多种包含A蛋白－配体的试剂以及介质，并且在商业上可获得，包括，例如，－vA High Capacity，vA Ultra和UltraPlus(Millipore)及Protein A Sepharose^TM，MabSelect^TM，MabSelect Xtra^TM和MabSelect(GE Healthcare)和Poros MabCaptureA^TM(Applied Biosystems)。

为了维持色谱分析用配体(所述配体包括，如，包含基于SpA的色谱分析用配体的树脂)的选择性和结合能力，需要对配体结合树脂(称作色谱分析基质)进行清洁，并且通常在碱性条件下清洗，如，使用氢氧化钠。举例来说，用于清洗和复原基质的标准过程是一种原位清洗(Cleaning-in-place，CIP)的碱性方案，一般包括使用pH14的1M NaOH对基质进行处理。但是，这种不太温和的处理经常是不期望的，当配体是一种蛋白或是基于蛋白的分子时尤其如此。

发明内容

本发明提供了具有碱稳定性的基于SpA的色谱分析用配体，例如，其能够耐受重复的原位清洗(CIP)循环。更特别的是，基于本发明的配体可以在延长的时间中耐受传统的碱性清洗，这使得所述配体成为引人注目的候选物，特别是对于免疫球蛋白进行低成本高效率且高水平的纯化而言尤为如此。

在本发明的一个方面，碱稳定性色谱分析用配体包含两个或更多个SpA结构域。例如，在这方面的一些实施方式中，提供了碱稳定性色谱分析用配体，所述配体包含两个或更多个葡萄球菌A蛋白(SpA)或其功能性片段或变体的B结构域或者两个或更多个SpA或其功能性片段或变体的Z结构域，所述两个或更多个B结构域或者两个或更多个Z结构域被附着在色谱分析树脂上，附着位点为树脂上的多于一个位点。