[发明专利]一种百香果品种鉴定专用引物及其品种鉴定方法

说明书

本发明公开了一种百香果品种鉴定专用引物及其品种检测方法，该百香果品种鉴定专用引物，为PE18引物对，其具体引物序列为：PE18 F：5′～GGGCATCGCAGAGTAACAG～3′，PE18 R：5′～GCCGTCCCATACCCAAGT～3′。本发明设计了27对在百香果中稳定扩增的引物，利用其中1对引物成功的构建了4个百香果品种指纹图谱，可快速、准确区分各百香果品种，可直接应用于百香果品种的分子鉴定，具有很好的实用性。

技术领域

本发明属于植物新品种鉴定技术领域，涉及一种百香果品种鉴定专用引物及其品种鉴定方法。

背景技术

百香果属于西番莲科西番莲属草质或半木质常绿藤本植物，花朵鲜艳优美，果汁风味独特、芳香怡人，又称激情果、番石榴、巴西果等，原产南美洲巴西至阿根廷一带。目前作为国内水果市场的“新宠”，其商业化品种主要有紫果、黄果、黄果与紫果杂交品种等3大类。

20世纪80年代前后，四川、广东、广西、贵州、云南、海南等地开始大量引种百香果，在引种过程中由于栽培者的随意命名导致同物异名、同名异物现象严重。通常品种鉴定的主要依据是表型特征，但表型性状易受环境影响，为品种鉴别带来一定难度。分子标记可以直接检测不同品种或个体在DNA分子水平上的差异，具有较高的多态性和个体特异性，且不受环境和生长阶段影响，能鉴定形态标记所难以鉴定的个体。目前，还没有百香果的分子鉴定方法。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种百香果品种鉴定专用引物，克服以往形态鉴定方法存在的缺陷，提供准确、可靠、便捷、灵敏度高的分子检测和诊断方法。本发明的另一目的是提供一种百香果品种鉴定方法，可以直接应用于生产实践，对于百香果种苗的鉴定具有十分重要的意义。

技术方案：为实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

一种百香果品种鉴定专用引物，为PE18引物对，其具体引物序列如下：

PE18 F：5′～GGGCATCGCAGAGTAACAG～3′，

PE18 R：5′～GCCGTCCCATACCCAAGT～3′。

所述的百香果品种鉴定专用引物，百香果品种为4种，分别为：平塘1号、紫香、黄金果和满天星。

应用所述的百香果品种鉴定专用引物构建获得的百香果品种指纹代码。

所获得的4个百香果品种对应指纹代码分别为：平塘1号：指纹代码1BB；紫香：指纹代码1AB；黄金果：指纹代码1CC；满天星：指纹代码1AA。

应用所述百香果品种鉴定专用引物快速鉴定百香果品种的方法，包括以下步骤：

1)待测样品DNA提取；

2)使用PE18引物对，以提取的DNA为模板，进行PCR扩增；

3)PCR产物则利用聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染法进行检测，依据扩增产物的有无和大小进行判读，对照品种指纹代码，鉴定出待测样品的品种。

步骤1)中，利用天根生化科技有限公司的植物基因组DNA提取试剂盒完成待测样品DNA提取。

步骤2)中，10μL PCR扩增反应体系包括：1×Buffer；0.25mM dNTP；1mM MgCl₂；0.3μM PE18引物；0.6U Taq DNA聚合酶和15ng DNA模板。

步骤2)中，PCR反应程序为：预变性94℃5min；30循环，94℃30s，58℃30s，72℃30s；延伸72℃3min，最终4℃保存。

所述的快速鉴定百香果品种的方法，百香果品种共计为4个，分别为：平塘1号、紫香、黄金果、满天星。