[发明专利]一种鉴别临床多种多重耐药细菌的荧光检测法

权利要求书

1.一种以非疾病的诊断和治疗为目的的鉴别临床多种多重耐药细菌的荧光检测法，其特征在于该方法通过单一小分子荧光探针实现多种临床分离的耐药菌的鉴别，具体按照如下步骤进行：

(1)细菌培养；

(2)细菌收集：在10000-14000rpm条件下离心5-10分钟，弃上清，用20mM、pH＝7.4的HEPES缓冲液清洗细菌2-3次，最后用HEPES重悬细菌；

(3)在待检测细菌中加入荧光探针，用荧光光谱仪检测；在345nm激发波长下检测荧光得到荧光光谱图，以荧光增强△S/S₀和荧光比率变化I₄₈₂/I₃₇₅作为探针响应的二维信号，用于鉴别不同种类细菌；所述S₀代表只有di-PYIM探针存在时的荧光积分面积，所述△S代表探针与各种细菌作用前后的荧光积分面积的绝对差值；

所述荧光探针的分子结构式如下：

2.根据权利要求1所述的以非疾病的诊断和治疗为目的的鉴别临床多种多重耐药细菌的荧光检测法，其特征在于：待检测细菌的浓度范围为大于10⁵CFU/mL，探针的浓度大于等于5μM。

3.根据权利要求1所述的以非疾病的诊断和治疗为目的的鉴别临床多种多重耐药细菌的荧光检测法，其特征在于：所述的细菌为革兰氏阳性病原菌或革兰氏阴性病原菌；

所述的革兰氏阳性病原菌为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌、蜡样芽胞杆菌、草绿色链球菌、棉子糖肠球菌、溶血葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、屎肠球菌、肺炎链球菌；

所述的革兰氏阴性病原菌为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、鲍曼不动杆菌、嗜肺性军团菌、克雷白氏杆菌、铜绿假单胞菌、洛菲不动杆菌、流感嗜血杆菌、肠炎沙门菌。

4.根据权利要求1所述的以非疾病的诊断和治疗为目的的鉴别临床多种多重耐药细菌的荧光检测法，其特征在于：步骤(1)中细菌培养至OD₆₀₀＝0.1-2.0。

5.根据权利要求1所述的鉴别临床多种多重耐药细菌的荧光检测法，其特征在于：步骤(2)中用HEPES重悬至细菌的OD₆₀₀＝0.05-2.0。

6.根据权利要求1～5中任意一权利要求所述的以非疾病的诊断和治疗为目的的鉴别临床多种多重耐药细菌的荧光检测法，其特征在于该方法用于鉴别野生型细菌及其人工抗药菌。

7.根据权利要求1～5中任一权利要求所述的以非疾病的诊断和治疗为目的的鉴别临床多种多重耐药细菌的荧光检测法，其特征在于该方法用于鉴别临床分离的多种抗药菌。