[发明专利]黄牛RET基因单核苷酸多态性位点的检测方法及其检测试剂盒和应用

权利要求书

1.一种黄牛RET基因单核苷酸多态性位点的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：以包含RET基因的待测黄牛全基因组DNA为模板，以引物对P为引物，PCR扩增黄牛RET基因；用限制性内切酶MaeI（XspI）消化PCR扩增产物，接着对酶切后的片段进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳；根据聚丙烯酰胺凝胶电泳结果结合测序判定黄牛RET基因第34690位的单核苷酸多态性位点的基因型；所述黄牛RET基因第34690位的单核苷酸多态性位点表现为AG、GG及AA三种基因型；

其中，所述引物对P为：

上游引物P1：5’-ACCCTGTTCGTGAATGACCT-3’；

下游引物P2：5’-TACAGGACCGCACCCTTCTA-3’。

2.根据权利要求1所述的黄牛RET基因单核苷酸多态性位点的检测方法，其特征在于，所述PCR扩增反应程序为95℃预变性10min；94℃变性30～50s，60℃退火30s，72℃延伸30～50s，30～40个循环；72℃延伸10min；4℃保存。

3.根据权利要求1所述的黄牛RET基因单核苷酸多态性位点的检测方法，其特征在于，所述聚丙烯酰胺凝胶电泳采用质量浓度为12%的聚丙烯酰胺凝胶。

4.根据权利要求1所述的黄牛RET基因单核苷酸多态性位点的检测方法，其特征在于，所述黄牛RET基因第34690位的单核苷酸多态性位点中AG基因型表现为219bp、200bp、19bp三条带、GG基因型表现为219bp一条带、AA基因型表现为219bp、19bp两条带。

5.黄牛RET基因单核苷酸多态性位点的检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒中包括引物对P，所述引物对P为：

上游引物P1：5’-ACCCTGTTCGTGAATGACCT-3’；

下游引物P2：5’-TACAGGACCGCACCCTTCTA-3’。

6.权利要求5所述黄牛RET基因单核苷酸多态性位点的检测试剂盒在黄牛分子育种中的应用。