[发明专利]萘霉素类化合物及其制备方法与其应用

权利要求书

1.如下结构式所示的萘霉素类化合物，

2.权利要求1所述的萘霉素类化合物的制备方法，其特征在于包括：

(1)发酵菌株：发酵菌株为Streptomyces KIB-H2054，由东北农业大学生物化工实验室提供，

(2)平板培养：采用MS培养基接种后，在28℃下培养5天，所述MS培养基为大豆粉20g/L，甘露醇20g/L，琼脂粉20g/L，pH＝7.0～7.2，使用去离子水配制和定容，于121℃下灭菌30分钟，

(3)种子培养：种子培养基用250mL的摇瓶每瓶分装，每瓶50mL，然后用竹签刮取平板上的孢子接种至摇瓶，置于摇床上于28℃，200rpm培养24～36小时，所述的种子培养基为胰蛋白胨17.0g/L，植物蛋白胨3.0g/L,氯化钠5.0g/L,磷酸氢二钾2.5g/L,葡萄糖2.5g/L，pH7.0～7.2，使用去离子水配制和定容，于121℃下灭菌30分钟；

(4)发酵：采用液体发酵方式，发酵培养基用1L的摇瓶分装，每瓶250mL，然后将预培养的种子液按照5％v/v的接种量加入摇瓶中，于28℃，200rpm培养5天，所述的发酵培养基为可溶性淀粉10.0g/L，胰蛋白胨5.0g/L，葡萄糖10.0g/L，甘油10.0g/L，酵母提取粉5.0g/L，CaCO₃ 3g/L，使用去离子水配制和定容，于121℃下灭菌30分钟；

(5)发酵液处理：20L发酵液经离心(4000rpm,25℃)，分成菌丝体和上清液两部分，菌丝体用丙酮浸泡超声提取后，减压蒸馏除去丙酮，以等体积乙酸乙酯萃取三遍，减压蒸馏浓缩得菌丝体浸膏；上清液用等体积乙酸乙酯萃取三遍，减压蒸馏浓缩得上清液浸膏。经HPLC分析两部分浸膏的成分后，基于相似的主要成分合并两部分浸膏；

(6)化合物制备：将粗提浸膏用60-100目的硅胶采用干法装柱的方式进行出分离，用体积比为1:0-1:1的石油醚-乙酸乙酯溶液进行梯度洗脱，得组分I-VI；纯液乙酸乙酯洗脱的组分(V)经凝胶柱色谱Sephadex LH-20，甲醇洗脱，得组分V1-V6；将组分V2经半制备HPLC(色谱柱YMC Triart C₁₈ 10×250mm,5μm)，使用50％乙腈水溶液(0.1％乙酸)的流动相进行洗脱得到化合物1和2；将组分V3经C18半制备柱，85％甲醇水溶液(0.1％乙酸)洗脱得化合物3和4；将组分V4经C18半制备柱，52％乙腈水溶液(0.1％乙酸)洗脱得化合物NapthomycinE；

(5)将5mg的Napthomycin E溶于1mL甲苯，在紫外光下照射30分钟，经C18半制备柱，使用80％甲醇水溶液(0.1％乙酸)的流动相进行洗脱得到化合物5和6。

3.一种治疗癌症的药物，包括治疗有效量的权利要求1所述的萘霉素类化合物，和至少一种药学上可接受的载体。

4.权利要求1所述的萘霉素类化合物在制备治疗癌症的药物中的应用。

5.权利要求1所述的萘霉素类化合物在制备治疗白血病、肝癌、肺癌、乳腺癌和结肠癌的药物中的应用。

6.如权利要求2所述的萘霉素类化合物的制备方法，其特征在于，所述的紫外光的波长为254nm。

7.如权利要求2所述的萘霉素类化合物的制备方法，其特征在于，所述的高效液相色谱法分离纯化采用250mm×10mm的C₁₈半制备柱，流速为3.0mL/min。