[发明专利]萘霉素类化合物及其制备方法与其应用

说明书

本发明提供萘霉素类化合物及其制备方法与其应用，属于天然药物化学领域，公开了六种新的萘霉素类化合物，及其利用链霉菌KIB‑H2054的发酵液制备方法，与其应用。本发明化合物经过多种波谱学表征，鉴定了其结构；化合物的细胞毒性筛选表明，六个化合物均具有较强的细胞毒活性。本发明的新化合物具有开发成抗癌药物的潜力，同时生产菌还具有培养条件温和、培养基配置简单易行、发酵时间短、产量大、易于大规模生产等优点。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种利用链霉菌的发酵液制备的六种萘霉素类新化合物及其制备方法与其应用，经结构鉴定，本发明六种化合物均为新化合物，分别命名为化合物1、2、3、4、5和6。

技术背景

安莎霉素(Ansamycins)类化合物是一类主要由微生物产生的结构较复杂的大环内酰胺类抗生素。这类化合物的结构特征是由一平面的芳香核和连接芳香核两个不相邻位置的脂肪链“桥”所组成的环状结构。安莎霉素类化合物几乎都具有良好的生物活性，其中最具有代表性的是格尔的霉素和美登木素的衍生物用于治疗肿瘤，利福霉素的衍生物用于治疗结核。萘霉素(Napthomycin)作为安莎霉素的一个亚族同样具有良好的生物活性，发掘新颖的萘霉素对于发现新药具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种萘霉素类化合物及其制备方法与其在制药中的应用，特别是在制备抗癌药物中的应用。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

如下结构式所示的萘霉素类化合物，

六个新化合物的制备方法，包括下列步骤：

1.发酵

(1)发酵菌株：发酵菌株为Streptomyces KIB-H2054，由东北农业大学生物化工实验室提供。

(2)平面培养：采用MS培养基(大豆粉20g/L，甘露醇20g/L，琼脂粉20g/L，pH＝7.0～7.2，使用去离子水配制和定容，于121℃下灭菌30分钟)，接种后在28℃下培养5天。

(3)种子培养：种子培养基(胰蛋白胨17.0g/L，植物蛋白胨3.0g/L,氯化钠5.0g/L,磷酸氢二钾2.5g/L,葡萄糖2.5g/L，pH 7.0～7.2，使用去离子水配制和定容，于121℃下灭菌30分钟)，用250mL的摇瓶每瓶分装50mL，然后用竹签刮取平面的孢子接种至摇瓶，置于摇床上28℃，200rpm培养24-36小时。

(4)发酵：采用液体摇瓶发酵，发酵培养基(可溶性淀粉10.0g/L，胰蛋白胨5.0g/L，葡萄糖10.0g/L，甘油10.0g/L，酵母提取粉5.0g/L，CaCO₃ 3g/L，使用去离子水配制和定容，于121℃下灭菌30分钟)，用1L的摇瓶每瓶分装250mL，然后按照5％v/v的接种量将预培养的种子液接种至摇瓶中，于28℃，200rpm培养5天。

2.发酵液处理：

20L发酵液经离心(4000rpm,25℃)，分成菌丝体和上清液；两部分，菌丝体用丙酮浸泡超声提取后，减压蒸馏除去丙酮，以等体积乙酸乙酯萃取三遍，减压蒸馏浓缩得菌丝体浸膏。上清液用等体积乙酸乙酯萃取三遍，减压蒸馏浓缩得上清液浸膏。经HPLC分析两部分浸膏的成分后，基于相似的主要成分合并两部分浸膏。

3.化合物制备