[发明专利]一种高效表达利拉鲁肽前体的重组工程菌及其应用有效
| 申请号： | 201810787109.2 | 申请日： | 2018-07-16 |
| 公开（公告）号： | CN110724187B | 公开（公告）日： | 2022-09-16 |
| 发明（设计）人： | 杨柏成;赵运星 | 申请（专利权）人： | 甘李药业股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/605 | 分类号： | C07K14/605;C12N15/16;C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君;陈征 |
| 地址： | 101102 北京市通州区中关村*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 表达 利拉鲁肽前体 重组 工程 及其 应用 | ||
1.利拉鲁肽前体分子的编码基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.10、SEQ IDNO.11、SEQ ID NO.12或SEQ ID NO.13所示。
2.含有权利要求1所述利拉鲁肽前体分子的编码基因的生物材料，所述生物材料为表达载体、表达盒、重组菌或转基因细胞系。
3.权利要求1所述利拉鲁肽前体分子的编码基因或权利要求2所述生物材料在利拉鲁肽的制备中的应用。
4.一种重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌通过以下方法构建得到：将权利要求1所述利拉鲁肽前体分子的编码基因连接到表达载体上，构建得到重组表达载体，再将重组表达载体转化入大肠杆菌中。
5.如权利要求4所述的重组工程菌，其特征在于，所述表达载体选自pET系列载体、pASK系列载体或pBad系列载体。
6.含有权利要求4或5所述的重组工程菌的菌剂。
7.权利要求4或5所述重组工程菌或权利要求6所述菌剂在利拉鲁肽的制备中的应用。
8.一种制备利拉鲁肽前体的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
(1)种子活化：挑取权利要求4或5所述重组工程菌接种至培养基；
(2)液体种子活化：从步骤(1)的培养基上挑取菌苔至液体种子培养基中，活化培养；
(3)发酵培养：步骤(2)的液体种子接种至液体发酵培养基，培养；
(4)收集菌体，破碎，洗涤包涵体；
(5)变性复性，酶切纯化。
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