[发明专利]一种赖氨酸脱羧酶突变体、其编码基因及其表达和应用

权利要求书

1.一种赖氨酸脱羧酶突变体，其特征在于，它是由氨基酸序列如SEQ ID No:2所示的赖氨酸脱羧酶通过定点突变得到，定点突变方法为如下(1)和(2)中的任意一种：

(1)将氨基酸序列如SEQ ID No:2所示的赖氨酸脱羧酶的第12位的缬氨酸突变为半胱氨酸，第41位的天冬氨酸突变为半胱氨酸，得到赖氨酸脱羧酶突变体V12C/D41C；

(2)将氨基酸序列如SEQ ID No:2所示的赖氨酸脱羧酶的第89位的亮氨酸突变为半胱氨酸，第442位的亮氨酸突变为半胱氨酸，得到赖氨酸脱羧酶突变体L89C/L442C。

2.根据权利要求1所述的赖氨酸脱羧酶突变体，其特征在于，其为赖氨酸脱羧酶突变体V12C/D41C。

3.编码权利要求1所述赖氨酸脱羧酶突变体的CadA基因，其特征在于，当赖氨酸脱羧酶突变体为赖氨酸脱羧酶突变体V12C/D41C时，CadA基因的核苷酸序列如SEQ ID No:3所示；当赖氨酸脱羧酶突变体为赖氨酸脱羧酶突变体L89C/L442C时，CadA基因的核苷酸序列如SEQ ID No:5所示。

4.包含权利要求3所述CadA基因的重组载体。

5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于，起始载体为pETDuet-1。

6.包含权利要求3所述CadA基因的重组菌株。

7.一种表达赖氨酸脱羧酶突变体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将权利要求4或5所述的重组载体转化至E.coli BL21(DE3)中，得到重组菌株；

(2)将重组菌株活化后接种于LB培养基中，当OD₆₀₀达到0.6-0.8时，加入IPTG诱导表达赖氨酸脱羧酶突变体。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述IPTG在LB培养基中的终浓度为0.01-1mM，所述诱导条件为18-37℃，10-12h。

9.权利要求1或2所述的赖氨酸脱羧酶突变体在合成1,5-戊二胺中的应用。