[发明专利]一种含有凝结芽孢杆菌的混合发酵微生态制剂方法

权利要求书

1.一种含有凝结芽孢杆菌的混合发酵微生态制剂方法，其特征在于：所述的基于蛋白质的药理活性物质组合物的制备方法包括以下步骤：

第一步，菌种的复壮活化，将所需的保加利亚乳杆菌、酿酒酵母、凝结芽孢杆菌的菌种接种到相对应的固体培养基上，放入恒温培养箱培养二十四小时后取出放入3-5℃冰箱保藏备用；

第二步，配置液体培养基进行种子液配置，首先分别进行保加利亚乳杆菌的培养基、酿酒酵母的培养基组、凝结芽孢杆菌的培养基配置，然后将配置好的保加利亚乳杆菌的培养基、酿酒酵母的培养基组、凝结芽孢杆菌的培养基分别放入灭菌锅中灭菌，待灭菌完成后放入无菌操作台，然后将第一步复壮活化菌种分别放置到灭菌后的保加利亚乳杆菌的培养基、酿酒酵母的培养基组、凝结芽孢杆菌的培养基内进行培养，得到保加利亚乳杆菌种子液、酿酒酵母种子液和凝结芽孢杆菌种子液，且培养时间为5—15小时；

第三步，二次培养，将第二步中经过培养得到的分别添加到相互独立的发酵罐罐内进行实消处理，然后将实消处理后的发酵罐罐内温度自然冷却至适宜菌种生长温度时，将第一步得到的复壮活化菌种分别添加到相应的发酵罐内进行扩大配用，且各发酵罐的培养时间均不低于10小时，完成发酵扩大配用后将三种菌液继续培养20—30小时，然后将保加利亚乳杆菌种子液、酿酒酵母种子液和凝结芽孢杆菌种子液以1：1：2的比例进行混合备用；

第四步，固态料生产，将第三步得到的三类菌液混合物与高温灭菌的固体载体混合，并在在无菌袋中于30℃静止培养2-7天，即可得到蛋白含量高和适口性好的微生态制剂产品。

2.根据权利要求1所述的一种含有凝结芽孢杆菌的混合发酵微生态制剂方法，其特征在于：所述的第二步中：

保加利亚乳杆菌的培养基按重量百分比由以下成份制备而成：蛋白胨20％—30％、牛肉膏10％—20％，酵母浸粉5％—10％，吐温3.5％—8.7％，磷酸氢二钾2.5％—4.7％，三水乙酸钠4.5％—10％，柠檬酸三铵2.5％—4.7％，硫酸镁0.5％—1.5％，硫酸锰0.1％—0.8％，余量为葡萄糖；

酿酒酵母的培养基为葡萄糖与马铃薯以1：8—15比例混合；

凝结芽孢杆菌的培养基按重量百分比由以下成份制备而成，牛肉膏20％—30％，氯化钠11％—27％，余量为蛋白胨。

3.根据权利要求1或2所述的一种含有凝结芽孢杆菌的混合发酵微生态制剂方法，其特征在于：所述的保加利亚乳杆菌的培养基PH为5.5—7.5。

4.根据权利要求1所述的一种含有凝结芽孢杆菌的混合发酵微生态制剂方法，其特征在于：所述的第二步中，将第一步复壮活化菌种分别放置到灭菌后的保加利亚乳杆菌的培养基、酿酒酵母的培养基组、凝结芽孢杆菌的培养基内进行培养时，首先接种好的菌液放入恒温培养箱在25℃—35℃恒温环境下通过摇床设备进行培养，其中培养时间为20—30小时，转速为100r/min—200r/min，完成培养后，再将配置好的培养基放入无菌操作台灭菌接种后放入摇床设备进行25℃—35℃恒温环境下扩大培养，其中转速为100r/min—200r/min，培养时间5—15小时。

5.根据权利要求1所述的一种含有凝结芽孢杆菌的混合发酵微生态制剂方法，其特征在于：所述的三步中，在对保加利亚乳杆菌种子液、酿酒酵母种子液和凝结芽孢杆菌种子液进行实消处理中，保加利亚乳杆菌种子液、酿酒酵母种子液和凝结芽孢杆菌种子液的发酵罐内均投放总量为保加利亚乳杆菌种子液、酿酒酵母种子液和凝结芽孢杆菌种子液总量0.5—3.5倍的营养物，其中：

保加利亚乳杆菌种子液实消用营养物按重量百分比由以下成份制备而成：酵母浸粉8％—10％，牛肉浸粉15％—29％，乙酸钠8％—10％，葡萄糖5％—11％，磷酸氢二钾5％—11％，乳糖40％—60％，余量为豆油；

酿酒酵母种子液实消用营养物按重量百分比由以下成份制备而成：蛋白胨30％—60％，葡萄糖30％—60％，余量为氯化钠；

凝结芽孢杆菌种子液实消用营养物按重量百分比由以下成份制备而成：蛋白胨30％—40％，酵母浸粉11％—25％，七水硫酸镁1％—3％，硫酸锰1％—3％，余量为葡萄糖。