[发明专利]用于中间球海胆生长性状的分子标记辅助育种引物及筛选方法

权利要求书

1.一种用于中间球海胆生长性状的分子标记辅助育种引物，其特征在于，所述引物选自如下的KASP引物组：

(1)SNP名称Marker49152，标记名称A007402，其对应的引物序列如SEQ ID NO.1、SEQID NO.2和SEQ ID NO.3所示；

(2)SNP名称Marker112898，标记名称A007399，其对应的引物序列如SEQ ID NO.4、SEQID NO.5和SEQ ID NO.6所示；

(3)SNP名称Marker140758，标记名称A007397，其对应的引物序列如SEQ ID NO.7、SEQID NO.8和SEQ ID NO.9所示；

(4)SNP名称Marker63934，标记名称A007389，其对应的引物序列如SEQ ID NO.10、SEQID NO.11和SEQ ID NO.12所示；

(5)SNP名称Marker203513，标记名称A007388，其对应的引物序列如SEQ ID NO.13、SEQID NO.14和SEQ ID NO.15所示；

(6)SNP名称Marker24433，标记名称A007376，其对应的引物序列如SEQ ID NO.16、SEQID NO.17和SEQ ID NO.18所示；

(7)SNP名称Marker72763，标记名称A007374，其对应的引物序列如SEQ ID NO.19、SEQID NO.20和SEQ ID NO.21所示；

(8)SNP名称Marker23360，标记名称A007366，其对应的引物序列如SEQ ID NO.22、SEQID NO.23和SEQ ID NO.24所示；

(9)SNP名称Marker13442，标记名称A007362，其对应的引物序列如SEQ ID NO.25、SEQID NO.26和SEQ ID NO.27所示；

(10)SNP名称Marker6879，标记名称A007358，其对应的引物序列如SEQ ID NO.28、SEQID NO.29和SEQ ID NO.30所示。

2.一种中间球海胆生长性状的分子标记辅助育种筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)利用中间球海胆已建立的遗传图谱，根据QTL定位结果，从中筛选出与生长性状相关的SLAF标签，再从与生长性状相关的SLAF标签中挑选出可用于设计KASP引物的SLAF标签；

(2)在可用于设计KASP引物的SLAF标签中能找到如权利要求1所述的SNP位点，并利用如权利要求1所述的引物进行PCR扩增，对获得的PCR产物进行荧光扫描分型，根据分型结果对设计的KASP引物进行验证；

(3)用KASP引物组对验证群体的DNA进行基因分型验证，最终获得可对候选SNP位点进行准确分型的KASP引物组，即得到与生长性状相关的KASP标记；

(4)根据验证群体的生长性状的表型数据及与生长性状相关的KASP标记分型结果，进行关联分析后获得与生长性状显著关联的分子标记，最终得到每个生长性状的预测模型，通过每个生长性状的预测值进行个体生长性状综合预测值计算，最终建立海胆的分子标记生长预测模型。

3.根据权利要求2所述的用于中间球海胆生长性状的分子标记辅助育种筛选方法，其特征在于，所述生长性状包括壳高、壳径、体重。

4.根据权利要求2所述的用于中间球海胆生长性状的分子标记辅助育种筛选方法，其特征在于，步骤(1)中与生长性状相关的SLAF标签的筛选标准为：当显著性阈值超过LOD临界值时，认为存在一个QTL位点，其中LOD＝2-3。

5.根据权利要求2所述的用于中间球海胆生长性状的分子标记辅助育种筛选方法，其特征在于，步骤(1)中用于设计KASP引物的SLAF标签的选取标准为：①SLAF标签中不存在插入缺失的SNP位点，②引物序列只能包含1个SNP位点，③根据碱基含量使退火温度控制在PCR要求的温度范围内，其中退火温度为55℃～65℃。