[发明专利]一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法

说明书

本发明涉及一种二抗染色方法，尤其涉及一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法。该方法包括以下步骤：S1、在组织切片中加入封阻液，使组织切片细胞中内源性的过氧化物酶失活；S2、在组织切片中加入相应的一抗，与组织切片细胞内的抗原蛋白反应结合；S3、在组织切片中加入反应增强液；S4、在组织切片中加入聚合物二抗，与一抗特异性的结合；S5、在组织切片中加入DAB浓缩液和DAB buffer的混合液，DAB沉淀着色；S6、在组织切片中加入苏木素复染液，与染色质结合显蓝色。本发明优化了常规免疫组化实验中所需的试剂成分，提高了免疫组化的染色强度，降低了可能产生的非特异性染色背景，极大的提高了染色质量。

技术领域

本发明涉及一种二抗染色方法，尤其涉及一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法。

背景技术

在临床病理诊断和形态学研究中，免疫组织化学(简称免疫组化)染色是一种很重要的技术和手段。免疫组化技术于上世纪70年代应用于病理诊断始，目前在全球病理界已经得到广泛应用，它已成为病理医生常规工作中不可缺少的部分。免疫组化技术拥有特异性、敏感性强及操作简便等优点，使得免疫组化技术在疾病诊断领域得到了广泛的推广和应用，特别是临床病理诊断和肿瘤转化诊断。免疫组化技术不仅能提高病理诊断的准确性，同时也渗透到了临床和基础学科，在探讨疾病的病因学、发病机制及科研工作中起到了不可估量的作用。

免疫组化是利用抗原抗体的特异性结合，通过标记物的显色，来检测和定位组织或细胞中的抗原蛋白。在免疫组化实验中需要多种试剂配合使用，常规的免疫组化染色通常是通过手工操作进行，过程繁琐耗时又长，而且稳定性较差，重复性较低。手工染色所用试剂的灵敏度、亲和性、稳定性和质量都有所不足，这也导致了手工染色质量参差不齐，很难完全满足临床病理诊断的要求。而全自动免疫组化染色仪的出现极大的提高了染色效率，运行过程中无需人工干预，操作便捷。但是一般的免疫组化试剂仅适用于手工操作的染色要求，而无法应用于全自动免疫组化染色仪，使得染色灵敏度较低。

发明内容

本发明为解决上述技术问题，提供设计合理、显著提高染色效果的一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：

一种用于全自动免疫组化染色仪的二抗染色方法，包括以下步骤：

S1、在组织切片中加入封阻液，使组织切片细胞中内源性的过氧化物酶失活；

S2、在组织切片中加入相应的一抗，与组织切片细胞内的抗原蛋白反应结合；

S3、在组织切片中加入反应增强液；

S4、在组织切片中加入聚合物二抗，与一抗特异性的结合；

S5、在组织切片中加入DAB浓缩液和DAB buffer的混合液，DAB沉淀着色；

S6、在组织切片中加入苏木素复染液，与染色质结合显蓝色。

本发明优化了常规免疫组化实验中所需的试剂成分，提高了免疫组化的染色强度，降低了可能产生的非特异性染色背景，极大的提高了染色质量。

进一步，所述封阻液为过氧化氢溶液，所述过氧化氢溶液的浓度为3％-4％。

进一步，所述反应增强液为兔抗鼠IgG溶液，所述兔抗鼠IgG溶液的浓度为5～10μg/mL。

进一步，所述DAB浓缩液为3，3-二氨基联苯胺四氯化氢溶液，所述3，3-二氨基联苯胺四氯化氢溶液的浓度为55～70mmol/L。

进一步，所述DAB Buffer为0.05～0.15％过氧化氢溶液。

进一步，所述苏木素复染液的浓度为0.05～0.15％。