[发明专利]用于检测猪流行性腹泻病毒野毒株的引物和探针及TaqMan实时荧光定量PCR方法在审
| 申请号： | 201810792753.9 | 申请日： | 2018-07-18 |
| 公开（公告）号： | CN108676922A | 公开（公告）日： | 2018-10-19 |
| 发明（设计）人： | 宋勤叶;刘京;李丽敏;郭海勇;陈立功 | 申请（专利权）人： | 河北农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11 |
| 代理公司： | 石家庄国为知识产权事务所 13120 | 代理人： | 林艳艳 |
| 地址： | 071000 河北省保定市*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 猪流行性腹泻病毒 野毒株 引物 实时荧光定量PCR 探针 分子诊断技术 特异性检测 快速检测 探针序列 特异性强 重要技术 检出率 检测 扩增 判定 防治 | ||
1.一种用于检测猪流行性腹泻病毒野毒株的引物和探针，其特征在于：
F引物：序列如SEQ ID NO:1所示；
R引物：序列如SEQ ID NO:2所示；
TaqMan探针：序列如SEQ ID NO:3所示。
2.如权利要求1所述的用于检测猪流行性腹泻病毒野毒株的引物和探针，其特征在于：所述TaqMan探针的荧光报告基团为FAM，荧光淬灭基团为TAMRA。
3.一种用于检测猪流行性腹泻病毒野毒株的试剂盒，其特征在于：包含权利要求1或2所述的引物和探针。
4.如权利要求3所述的用于检测猪流行性腹泻病毒野毒株的试剂盒，其特征在于：还包含猪流行性腹泻病毒野毒株阳性参考品，所述阳性参考品为含有猪流行性腹泻病毒野毒株RNA的质粒。
5.一种用于检测猪流行性腹泻病毒野毒株的TaqMan实时荧光定量PCR方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)提取待检样品中的总RNA；
(2)对待检样品中总RNA进行逆转录得cDNA；
(3)将权利要求1或2所述的引物和探针加入实时荧光定量PCR反应体系中，以逆转录获取的cDNA为模板，进行实时荧光定量PCR扩增；
(4)根据扩增结果进行判定，若Cq≤36，则判定为阳性，即待检样品中含有猪流行性腹泻病毒的野毒株；若Cq＞36，则判定为阴性，即待检样品中不含猪流行性腹泻病毒的野毒株。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述PCR反应体系中F引物、R引物和TaqMan探针的浓度均为250nM。
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增的条件为：95℃30S进行预变性，共1个循环；95℃反应5s，55℃反应30s，共45个循环；55℃时，采集荧光信号。
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