[发明专利]一种稻曲病人工接种方法

权利要求书

1.一种稻曲病人工接种方法，其特征在于，包含以下操作步骤：

(1)采集新鲜稻曲球，采用组织培养法分离病菌，纯化后接种于PSA培养基斜面，28℃，黑暗培养48h；

(2)取活化好的稻曲病菌PSA菌块3块转接到无菌的100mL PSB培养液中，28℃，150rpm黑暗恒温培养7d；从刚培养好的新鲜的稻曲病菌PSB培养液中吸取菌液0.5mL移入新鲜的PSB培养基中继续振荡培养；

(3)28℃黑暗恒温振荡培养7～9d后，匀浆制成菌丝片段与分生孢子的混合液，以此作为接种液；

(4)将水稻进行常规浸种、消毒和育苗后，移栽温室，进行常规栽培管理，栽培期间不施用农药；

(5)在水稻孕穗期间于17:00至19:00进行穗苞注射接种，接种的部位为水稻穗苞中部，接种时采用5mL注射器，针头向下倾斜与穗苞成45°夹角，将接种液从侧面注射入穗苞，每个穗苞注射2.5～4mL；

(6)水稻接种后展开温棚的遮阳网，并启动温棚的自动喷淋系统，具体设置为每个水泥池上方配备1个喷射面积达2m²的雾化喷头，每天喷淋9次，每隔4h喷淋一次，每次喷淋5min，其中12:00至16:00之间喷淋间隔时间设置为60min；

(7)水稻人工注射接种稻曲病菌30d后，割下所有稻穗，统计接种穗发病率和病穗平均病粒数。

2.根据权利要求1中的一种稻曲病人工接种方法，其特征在于：所述PSA培养基的制备方法为：马铃薯200g加水500g煮沸后过滤，取滤液加入蔗糖20～40g，琼脂18g，0.1M盐酸调节pH至6.0～7.0，加双蒸水定容至1L，121℃，30min高压蒸汽灭菌备用。

3.根据权利要求1中的一种稻曲病人工接种方法，其特征在于，所述PSB培养基的制备方法为：马铃薯200g加水500g煮沸后过滤，取滤液加入蔗糖20～40g，0.1M盐酸调节pH至6.0～7.0，加双蒸水定容至1L，121℃，30min高压蒸汽灭菌备用。

4.根据权利要求1中的一种稻曲病人工接种方法，其特征在于：所述孕穗期为孕穗中后期，叶耳距为7～11cm，最适叶耳距为8～9cm。

5.根据权利要求1中的一种稻曲病人工接种方法，其特征在于：所述接种液中分生孢子数为2×10⁶～1×10⁷个/mL。

6.根据权利要求1中的一种稻曲病人工接种方法，其特征在于，所述组织培养法具体步骤如下：取外层包有灰白色膜层的稻曲球，用消过毒的刀片从侧面把稻曲球切开，然后再在新切面上再切一次，两次切的方向互相垂直，用无菌接种针在第二个切面上挑取内层菌丝体和厚垣孢子接种于PSA培养基上，28℃培养72h，挑取单菌落接种于PSA培养基斜面培养。