[发明专利]一种稻曲病人工接种方法

说明书

本发明公开了一种稻曲病人工接种方法，涉及微生物培养领域。本发明可稳定高效诱发不同品种水稻的稻曲病，接种穗发病率达到100％，病穗平均病粒数可达88.36粒。发病稻株可用于研究稻曲病的发病过程及水稻对稻曲病的抗感性评价，也可用于稻曲病防治药物的研发。

技术领域

本发明涉及微生物培养领域，特别涉及一种稻曲病人工接种方法。

背景技术

稻曲病是世界性水稻真菌病害，自从Cooke于1878年首次在印度取样采得水稻稻曲病病原菌后，现在该病己广泛分布在全球水稻主产区，包括美洲、南亚各国等40多个国家。该病害在大丰收时发生严重，也被称为“丰收病”，在过去年间只在中晚稻田零星发生，一直没有被人们所重视，从而被作为次要病害防治。但是90年代以后，随着密穗型高产、直立型水稻品种以及杂交水稻的推广力度的加大，并且农田土壤肥力的增加，该病害的发生也越来越严重，甚至在某些水稻种植区域己经作为主要的病害来应对处理，稻曲病对水稻的产量和品质都造成严重的影响，稻曲病菌产生的毒素，对人和动植物都有极大的毒性，给农业生产带来重大的损失。

稻曲病菌的有性态为子囊菌亚门拟黑粉菌属稻麦角菌，无性态为半知菌亚门绿核菌属绿核菌。病菌可以产生无性态的厚垣孢子、有性态的子囊孢子以及薄壁分生孢子。发生稻曲病的稻穗上的稻曲球表面附着的厚垣孢子是田间最常见的孢子形态，厚垣孢子黄色或墨绿色，圆形或稍椭圆形，表面有许多统状突起，黑色的厚垣孢子胞内基质浓缩，不易萌发，除非打破休眠状态，而黄色的厚垣孢子胞内基质均匀，比较容易萌发。稻曲病菌有性阶段形成的菌核黑色，呈纺锤形或马蹄形，能萌发形成子座、子囊壳、子囊和子囊孢子。厚垣孢子和子囊孢子萌发可以产生分生孢子，接着分生孢子萌发形成次生分生孢子，迄今分生孢子被认为是病菌有效的侵染形态。

稻曲病的人工接种研究通常是在水稻孕穗期采用厚垣抱子、分生抱子喷雾法和注射法进行接种，但实际操作中使用厚垣孢子的接种难度大，并且分生孢子作为接种体的接种效果明显优于厚垣孢子。

目前，关于水稻品种对稻曲病的抗性评价大多是通过调查某地区、某一田块中种植的不同品种自然感染稻曲病的轻重差，或是在田间条件下通过自然诱发与人工辅助接种相结合的方法，来判断某一品种对稻曲病的抗感性。但是田间稻曲病的发生易受生态环境、气候条件等多种因素的影响，相同水稻品种在不同地方表现出的抗感程度有差异。考虑到影响田间稻曲病发生的环境因素，水稻品种对稻曲病的抗性评价工作可在田间多点异地自然诱发的抗性评价结果基础上，增加水稻品种室内人工接种测定，这样可以更有效地反映出水稻品种的抗感性。

发明内容

本发明所要解决的技术问题：针对目前稻曲病人工接种方法研究中出现的问题，提供一种稻曲病人工接种方法，便于后续水稻抗感性的分级鉴定。

为解决上述技术问题，本发明提供以下的技术方案：

一种稻曲病人工接种方法，包含以下操作步骤：

(1)采集水稻稻曲球，采用组织培养法分离病菌，纯化后接种于PSA培养基斜面，28℃，黑暗培养48h；

(2)取活化好的稻曲病菌PSA菌块3块转接到无菌的100mL PSB培养液中，28℃，150rpm黑暗恒温培养7d；从刚培养好的新鲜的稻曲病菌PSB培养液中吸取菌液0.5mL移入新鲜的PSB培养基中继续振荡培养；

(3)28℃黑暗恒温振荡培养7～9d后，匀浆制成菌丝片段与分生孢子的混合液，以此作为接种液；

(4)将水稻进行常规浸种、消毒和育苗后，移栽温室，进行常规栽培管理，栽培期间不施用农药；

(5)在水稻孕穗期间于17:00至19:00进行穗苞注射接种，接种的部位为水稻穗苞中部，接种时采用5mL注射器，针头向下倾斜与穗苞成45°夹角，将接种液从侧面注射入穗苞，每个穗苞注射2.5～4mL；