[发明专利]一种海洋无脊椎动物细胞培养基

权利要求书

1.一种海洋无脊椎动物细胞培养基在培养曼氏无针乌贼肝脏细胞中的应用，该海洋无脊椎动物细胞培养基由基础培养基和天然培养基组成，其特征在于，所述的天然培养基为海参体腔液，海参体腔液与基础培养基的体积比为3：（1.5-7）；所述的海参体腔液由以下方法制备而成：

（1）选取健康的海参，收集体腔原液；

（2）去除所述的体腔原液中的免疫分子、细胞和微生物，获得体腔液预处理液；

所述的免疫分子包括补体和凝集素，去除体腔原液中补体和凝集素的方法为：将所述的体腔原液置于40-50℃水浴中，孵育20-40min，获得补体失活的体腔原液；将补体失活的体腔原液快速冷却至20℃，向体腔原液中加入外源性红细胞，静置1.5-2.5h，获得已去除凝集素的体腔原液；

（3）将所述的体腔液预处理液的盐度调整至与基础培养基相一致，获得所述的海参体腔液。

2.如权利要求1所述的海洋无脊椎动物细胞培养基在培养曼氏无针乌贼肝脏细胞中的应用，其特征在于，按质量百分数计，所述的外源性红细胞的终浓度为0.1-5.0％。

3.如权利要求1所述的海洋无脊椎动物细胞培养基在培养曼氏无针乌贼肝脏细胞中的应用，其特征在于，步骤（2）中，将已去除免疫分子的体腔原液在1500-4000r/min下离心2-8min，去沉淀，获得已去除细胞的体腔原液。

4.如权利要求1所述的海洋无脊椎动物细胞培养基在培养曼氏无针乌贼肝脏细胞中的应用，其特征在于，步骤（2）中，将已去除细胞的体腔原液依次采用孔径为0.22μm的无菌超细膜、孔径为0.1μm的无菌超细膜过滤，获得所述的体腔液预处理液。

5.如权利要求1所述的海洋无脊椎动物细胞培养基在培养曼氏无针乌贼肝脏细胞中的应用，其特征在于，所述的基础培养基中至少含有碳源、氨基酸、无机离子和维生素；

以1L基础培养基计，所述的基础培养基中含有0.5-10.0g碳源，所述的氨基酸至少包括L-谷氨酰胺、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸和L-缬氨酸，所述的无机离子至少包括钠、钾、镁和钙；所述的维生素至少包括维生素B、维生素E。

6.如权利要求5所述的海洋无脊椎动物细胞培养基在培养曼氏无针乌贼肝脏细胞中的应用，其特征在于，所述的基础培养基中还含有抗生素、激素和细胞因子；

以1L基础培养基计，所述的抗生素至少包括氨苄青霉素，所述的激素至少包括胰岛素，所述的细胞因子至少包括生长因子。