[发明专利]培养基及其用于建立HBV感染的人源原代肝癌细胞系的方法

权利要求书

1.一种培养基，其特征在于，包括以下成分：

基础培养基，ROCK抑制剂1～50mM，氢化可的松10～100μg/mL，胰岛素1～10mg/mL，L-谷氨酸50～500mM，青霉素/链霉素；

所述基础培养基为RPMI1640基本培养基或DMEM完全培养基。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，包括以下成分：

基础培养基，ROCK抑制剂10～50mM，氢化可的松25～100μg/mL，胰岛素5～10mg/mL，L-谷氨酸50～200mM，青霉素/链霉素。

3.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，包括以下成分：

基础培养基，ROCK抑制剂10～30mM，氢化可的松25～50μg/mL，胰岛素5～8mg/mL，L-谷氨酸50～100mM，青霉素/链霉素。

4.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，包含：青霉素10,000～15,000U/mL，链霉素10,000～15,000μg/mL。

5.根据权利要求1-4任一项所述的培养基，其特征在于，所述ROCK抑制剂为Y-27632。

6.建立可复制HBV感染状态的人源原代肝癌细胞系的方法，其特征在于，包括下列步骤：

收集人体肝细胞癌组织，采用酶消化法或组织贴壁法对其进行原代细胞培养和传代培养，建立人源原代肝癌细胞系；

所述培养采用权利要求1-5任一项所述的培养基进行。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述酶消化法进行原代细胞培养所用的消化酶为：I型胶原酶，I型胶原酶的加入浓度优选为50～100μg/mL。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述原代细胞培养和传代培养的培养条件为：5～6％CO₂、35～37℃、饱和湿度。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述传代培养时：第一代至第三代培养时在培养基中加入8～12％胎牛血清，优选10～12％胎牛血清。

10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述酶消化法进行原代细胞培养的过程为：在含所述I型胶原酶的基础培养基中孵育人体肝细胞癌组织1～3小时，至无肉眼可见组织团块；然后4℃以下离心，去除上清；再以所述基础培养基重悬细胞沉淀，再4℃以下离心去除上清，所得细胞沉淀即以所述培养基培养，使细胞贴壁。