[发明专利]培养基及其用于建立HBV感染的人源原代肝癌细胞系的方法

说明书

本发明提供了一种培养基及其用于建立HBV感染的人源原代肝癌细胞系的方法。一种培养基，包括以下成分：基础培养基，ROCK抑制剂1～50mM，氢化可的松10～100μg/mL，胰岛素1～10mg/mL，L‑谷氨酸50～500mM，青霉素/链霉素。建立细胞系的方法：收集人体肝细胞癌组织，采用酶消化法或组织贴壁法对其进行原代细胞培养和传代培养，在以上培养基中培养，建立人源原代肝癌细胞系。本发明所建立的原代肝癌细胞系能极大程度地保有肿瘤细胞在体内时的特点，用于药物筛选时对药物处理的反应性较真实；并且该方法体现了个体的特异性，因此为个体病例开展药物筛选提供了技术平台，为肿瘤患者用药提供关键参考。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其是涉及一种培养基及其用于建立 HBV感染的人源原代肝癌细胞系的方法。

背景技术

现有药物筛选模型一般是基于实验系统来评价药物的药理作用。由于药物筛选要求实验方案标准化且定量化，因而目前较多进行细胞水平的筛选。现有技术多依赖永生化细胞系，或基于细胞系的小鼠异种移植模型。这类平台的优势在于可以大规模扩增细胞以开展高通量筛选实验。但是其缺陷是永生化细胞系由于过表达了SV40、hTERT 等并经过体外长时间培养和传代，它已失去了典型的原代细胞特征，不能充分代表来源个体和组织对于药物处理的敏感性和特异性，所以每年都有数十亿美元花在新靶点药物的III期临床试验上，但结果往往并不理想。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的第一目的在于提供一种培养基，该培养基可用于人源性肝癌细胞的培养，并且经过8次以上传代培养后，仍能检测到HBV 核心抗原和表面抗原的表达，为人源原代肝癌细胞系的建立提供了可靠条件。

本发明的第二目的在于提供建立可复制HBV感染状态的人源原代肝癌细胞系的方法，该方法所建立的原代肝癌细胞系能极大程度地保有肿瘤细胞在体内时的特点，用于药物筛选时对药物处理的反应性较真实；并且该方法体现了个体的特异性，因此为个体病例开展药物筛选提供了技术平台，为肿瘤患者用药提供关键参考。

为了解决以上技术问题，本发明提供了以下技术方案：

一种培养基，包括以下成分：

基础培养基，ROCK抑制剂1～50mM，氢化可的松10～100μg/mL，胰岛素1～10mg/mL，L-谷氨酸50～500mM，青霉素/链霉素；

所述基础培养基为RPMI1640基本培养基或DMEM完全培养基。

本发明培养基的核心是加入ROCK抑制剂以及所有成分的含量。虽然培养基中的每个成分为常规培养基成分，但是各成分的有机组合以及含量并非常规的，本发明正是利用这些特点组成一种适宜培养人源肝癌细胞的培养基，该培养基能够高效建立HBV感染状态的人源原代肝癌细胞系。本发明的高效特性体现在以下方面：

一、细胞的传代速率快：可在6-8周内传代至7代以上；

二、能够高度保留原代细胞在体内的典型特征：经过8次以上传代培养后，仍能检测到HBV核心抗原和表面抗原的表达。

本发明仅仅列举了以上培养基在建立HBV感染状态的人源原代肝癌细胞系方面的优势，但本发明对培养基的用途不做限制，其可能用于其他待开拓的领域。

另外，上述培养基还可以从含量以及成分类型上进一步改进，具体如下。

优选地，包括以下成分：

基础培养基，ROCK抑制剂10～50mM，氢化可的松25～100μg/mL，胰岛素5～10mg/mL，L-谷氨酸50～200mM，青霉素/链霉素。

优选地，包括以下成分：