[发明专利]DNA双标记效率检测方法

权利要求书

1.一种DNA双标记效率检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

制作两份具有荧光标记的互补单链DNA溶液，分别记为溶液A和溶液B；

制作没有荧光标记的序列相同的两条互补单链DNA溶液，分别记为溶液C和溶液D；

调节溶液A～D浓度，使单链DNA的浓度基本一致；

将等体积的溶液A和B以及预定体积的缓冲液混合退火处理，得到溶液一；

将等体积的溶液A、B、C和D混合，进行退火处理，得到溶液二；

将溶液一和溶液二分别通过预设的激光共聚焦荧光相关谱光路中进行探测计算，分别获取溶液一和溶液二的荧光分子处于三态的比例p₁和p₂，以及溶液一和溶液二的相关曲线的y轴截距G₁(0)和G₂(0)，所述DNA双标记效率DDLE通过以下公式计算获得：

2.根据权利要求1所述的DNA双标记效率检测方法，其特征在于，退火处理具体为：将混合后的溶液在95℃孵育5分钟，然后逐渐降温到25℃，降温速率保持在0.5℃/分钟。

3.根据权利要求1所述的DNA双标记效率检测方法，其特征在于，调节单链DNA的浓度具体为：使各溶液的浓度逐步稀释，直到各溶液的紫外吸收光谱在260nm峰值处吸收OD一致。

4.根据权利要求1所述的DNA双标记效率检测方法，其特征在于，所述缓冲液为TE缓冲液，配比为10mmol/L Tris-HCl及1mmol/L EDTA。

5.根据权利要求1所述的DNA双标记效率检测方法，其特征在于，所述激光共聚焦荧光相关谱光路包括：由He-Ne激光器光路通过显微镜的水镜聚焦在一个半径几十到几百纳米的共聚焦区域，用于放置溶液样品，进行参数测量。

6.根据权利要求5所述的DNA双标记效率检测方法，其特征在于，激光探测光路分为两束、通过30微米直径的小孔被两个探测器采集，且两路采集的光路进行互相关处理。

7.根据权利要求4所述的DNA双标记效率检测方法，其特征在于，所述TE缓冲液的体积为溶液A的两倍。