[发明专利]一种人类粪便DNA提取方法

权利要求书

1.一种人类粪便DNA提取方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

步骤一，粪便样品的采集：

人排出粪便后，立即采集2-5g粪便样品放入采集管中，采集管中装有10-15mL粪便保存液，摇匀采集管使粪便样品与粪便保存液充分混匀；

所述粪便保持液成分：0.3-0.6M EDTA，3-6M NaCl，0.3-1.5M Tris；

步骤二，粪便样品的运输：

在常温或低温条件下常规物流运输采集的粪便样品，并在3天内到达实验室进行处理；

步骤三，粪便样品的取样：

粪便样品到达实验室后，充分混匀，吸取800μL-2000μL粪便样本放入离心管中，再次混匀；

步骤四，粪便样本的DNA提取：

(1)细胞沉淀

将装有粪便样本的离心管在10000-13000rpm条件下离心2-5分钟，保留沉淀，去除上清液；

(2)细胞裂解释放DNA

向步骤(1)的离心管中加入800-1000μL粪便裂解液，使其与沉淀彻底混匀后，在68-75℃条件下温育10分钟；

所述粪便裂解液成分：0.5-1.2％(m/v)CTAB，0.8-1.4MNaCl，0.08-0.12％(m/v)Tris，10-15mM EDTA，0.1-0.2M异巯基乙醇；

(3)沉淀杂质

将步骤(2)的离心管在10000-13000rpm条件下离心1分钟，将上清液转移至新的离心管中，除去沉淀杂质；

(4)去杂质纯化DNA

在步骤(3)得到的上清液中加入杂质分离液500-600μL，彻底混匀5-10分钟，然后在10000-13000rpm条件下离心5-10分钟，液体分为三层，将上层清液转移至新的离心管中，除去中下层沉淀杂质，此步骤中转移上层清液需在生物安全柜中进行；

所述杂质分离液成分：氯仿；

(5)磁珠结合DNA

向步骤(4)得到的上清液中加入磁珠结合液600-800μL，磁珠30-100μL，室温条件下孵育15-30分钟，得到磁珠混合液；

所述磁珠结合液成分：异丙醇；

(6)磁珠洗涤及DNA洗脱

将步骤(5)得到的磁珠混合液放置于磁力架上3-10分钟，待磁珠彻底吸附后使用磁珠洗涤液清洗2次，加入100-200μL磁珠洗脱液，室温洗脱10分钟后置于磁力架上，待磁珠吸附后，吸取洗脱液到新的离心管中，该洗脱液即为含DNA的溶液；

所述磁珠洗涤液成分：体积分数为75％-80％的乙醇；

所述磁珠洗脱液成分：无核酸酶水。

2.根据权利要求1所述的人类粪便DNA提取方法，其特征在于，所述粪便裂解液成分为1％CTAB，1M NaCl，0.1％Tris，15mMEDTA，0.2M异巯基乙醇。