[发明专利]特异抑制3β-HSD基因表达的shRNA重组载体构建与应用

权利要求书

1.一种抑制3β-HSD基因表达的重组载体，其特征在于，包括慢病毒载体及插入在所述慢病毒载体中干扰性shRNA，所述干扰性shRNA包括依次连接的靶序列、茎环结构、所述靶序列的互补序列以及终止位点，其中，所述靶序列如SEQ.ID.NO.2或SEQ.ID.NO.3所示；所述慢病毒载体为PLVX-shRNA2P，所述PLVX-shRNA2P包括BamHI酶切位点、EcoRI酶切位点及KpnI酶切位点，所述干扰性shRNA包括BamHI酶切位点粘性末端及EcoRI酶切位点粘性末端，所述干扰性shRNA正向插入所述BamHI酶切位点和所述EcoRI酶切位点之间。

2.根据权利要求1所述的抑制3β-HSD基因表达的重组载体，其特征在于，所述干扰性shRNA的正义链如SEQ ID No.6所示，反义链如SEQ ID No.7所示；

或者，所述干扰性shRNA的正义链如SEQ ID No.8所示，反义链如SEQ ID No.9所示。

3.一种抑制3β-HSD基因表达的重组载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

提供如权利要求1或2所述的抑制3β-HSD基因表达的重组载体的干扰性shRNA；及

将所述干扰性shRNA插入慢病毒载体中，得到抑制3β-HSD基因表达的重组载体。

4.一种抑制3β-HSD基因表达的慢病毒，其特征在于，通过如下步骤制得：

将如权利要求1或2所述的抑制3β-HSD基因表达的重组载体转染进入293FT细胞中；及

对转染后的所述293FT细胞扩增表达，获得所述抑制3β-HSD基因表达的慢病毒。

5.一种重组工程菌，其特征在于，所述重组工程菌内含有权利要求1～2任一项所述的抑制3β-HSD基因表达的重组载体或如权利要求4所述的抑制3β-HSD基因表达的慢病毒。

6.如权利要求1～2任一项所述的抑制3β-HSD基因表达的重组载体、如权利要求4所述的抑制3β-HSD基因表达的慢病毒或如权利要求5所述的重组工程菌在制备抑制3β-HSD基因表达的药物中的应用。

7.如权利要求1～2任一项所述的抑制3β-HSD基因表达的重组载体、如权利要求4所述的抑制3β-HSD基因表达的慢病毒或如权利要求5所述的重组工程菌在制备缓解和治疗塑化剂中毒的药物中的应用。

8.一种药物组合物，其特征在于，包括如权利要求1～2任一项所述的抑制3β-HSD基因表达的重组载体、如权利要求4所述的抑制3β-HSD基因表达的慢病毒或如权利要求5所述的重组工程菌。