[发明专利]一种利拉鲁肽的合成方法

权利要求书

1.一种利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

(1)以2-Cl-Trt树脂为固相载体，经活化剂和缩合剂的缩合反应，并采用特异性微波技术反应，以Fmoc-保护氨基酸为缩合原料，依次缩合利拉鲁肽氨基酸序列中相对应的氨基酸，其中赖氨酸采用Fmoc-Lys(Dde)-OH，得到Fmoc-利拉鲁肽Ⅰ-2-Cl-Trt树脂，如下式所示：

Fmoc-H(Trt)AE(OtBu)GT(tBu)FT(tBu)S(tBu)D(OtBu)VS(tBu)S(tBu)Y(tBu)LE(OtBu)GQ(Trt)AAK(Dde)E(OtBu)FIAW(Boc)LVR(pbf)GR(pbf)G-2-Cl-Trt树脂；

(2)脱除赖氨酸的侧链保护基Dde，通过固相合成法，在赖氨酸侧链偶联Fmoc-Glu(OtBu)-OH，并在谷氨酸侧链上连接棕榈酸，得到利拉鲁肽Ⅱ-2-Cl-Trt树脂，如下式所示：

Boc-H(Trt)AE(OtBu)GT(tBu)FT(tBu)S(tBu)D(OtBu)VS(tBu)S(tBu)Y(tBu)LE(OtBu)GQ(Trt)AAK(gamaE-pal)E(OtBu)FIAW(Boc)LVR(pbf)GR(pbf)G-2-Cl-Trt树脂；

(3)裂解，脱除保护基和树脂得到利拉鲁肽粗肽；利拉鲁肽粗肽产品如下式所示：

HAEGTFTSDVSSYLEGQAAK(gamaE-pal)EFIAWLVRGRG；

(4)纯化，冻干，转盐，冻干，得到利拉鲁肽醋酸盐。

2.根据权利要求1所述的一种利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤(1)中所述的2-Cl-Trt树脂的取代度为0.66mmol/g。

3.根据权利要求1所述的一种利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤(1)中缩合反应过程中以DIC/HoBt为活化剂和缩合剂，缩合反应时间为20-30min。

4.根据权利要求1所述的一种利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤(1)中在氨基酸的缩合反应步骤，缩合反应15min后，将Fmoc-利拉鲁肽-2-Cl Trt树脂使用特异性的微波合成反应15-20s，微波输出功率150w-200w。

5.根据权利要求1所述的一种利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤(1)中缩合的Fmoc-保护氨基酸为：Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Dde)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-His(Trt)-OH，缩合反应中氨基酸投料量为2倍所投树脂摩尔数，缩合反应温度为25-30℃。

6.根据权利要求1所述的一种利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤(2)所述脱除赖氨酸的侧链保护基Dde的脱除反应，脱除试剂为水合肼：DMF＝1:15体积比的混合溶液，反应液体积为反应器容积的1/3-1/2。

7.根据权利要求1所述的一种利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：步骤(4)所述转盐具体为：将50-60mg冻干的利拉鲁肽溶解在6-7ml体积分数为0.2-0.4％的醋酸水溶液中，然后加入到250-300mg强阴离子树脂中，磁力搅拌器上室温下反应0.5小时，过滤，收集滤液，树脂用1-2ml体积分数为0.2-0.4％醋酸水溶液洗涤3次，收集洗脱液，与滤液合并。