[发明专利]一种利拉鲁肽的合成方法

说明书

本发明公开了一种利拉鲁肽的合成方法，具体包括以下步骤：以2‑Cl‑Trt树脂为固相载体，经活化剂和缩合剂的缩合反应，并采用特异性微波技术反应，以Fmoc‑保护氨基酸为缩合原料，依次缩合利拉鲁肽氨基酸序列中相对应的氨基酸，其中赖氨酸采用Fmoc‑Lys(Dde)‑OH，得到Fmoc‑利拉鲁肽Ⅰ‑2‑Cl‑Trt树脂；脱除赖氨酸的侧链保护基Dde，通过固相合成法，在赖氨酸侧链偶联Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH，并在谷氨酸上连接棕榈酸，得到利拉鲁肽Ⅱ‑2‑Cl‑Trt树脂；裂解，脱除保护基和树脂得到利拉鲁肽粗肽；利拉鲁肽粗肽产品；最后纯化，冻干，转盐，冻干，得到利拉鲁肽醋酸盐；采用Fmoc固相合成法，以2‑Cl‑Trt树脂为固相载体，以DIC/HoBt为缩合剂，采用特异性微波合成技术，提高了缩合效率。

技术领域

本发明属于多肽药物合成的技术领域，具体是一种利拉鲁肽的合成方法。

背景技术

利拉鲁肽，多肽序列为HAEGTFTSDVSSYLEGQAAK(gamaE-pal)EFIAWLVRGRG，分子量为3751.20Da。利拉鲁肽是通过基因重组技术，利用酵母生产的人胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物，具有降低血糖、减轻体重、促进胰岛细胞再生以及心血管系统保护等多种效应，临床应用前景广阔。

现有的利拉鲁肽生产方法及缺陷如下：

1、基因工程法，由于利拉鲁肽是一个具有支链修饰的非天然活性多肽，所以生产技术难度极大，设备要求高，大规模生产风险大，成本高，不利于工业化生产。

2、固液合成法，需经过片段固相合成、全保护切割、全保护片段纯化、片段缩合等几个不同的阶段，生产周期长。同时由于片段是全保护多肽，非常疏水，所以大大的增加了纯化的难度。这就给大规模生产带来了周期长，成本高的问题。

3、CN102286092A的发明报道的Fmoc-Lys(Alloc)-OH方法，由于所采用的是先液相合成支链化合物(Palmitoyl-Glu-OtBu)，同样也需要进行反复纯化的问题。选择Fmoc-Lys(Alloc)-OH作为侧链修饰用保护氨基酸的方法所带来的弊端，在脱Alloc保护时对生产设备和生产环境带来了更高的要求以及更长的生产周期，主要表现在以下几个方面：1)由于脱Alloc保护基要用到的四三苯基膦钯对空气、光、热等非常敏感，反应要求在无空气、避光的条件下才能有效的进行；2)要求对保护肽树脂在高真空的条件下40℃加热干燥4小时；3)试剂四三苯基膦钯价格昂贵，所需反应时间长(长达2小时)，并且需要在氩气的保护下进行；4)由于反应是在封闭的状态下进行，取样困难，不利于中控，对大规模工业化生产带来了很大的风险。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利拉鲁肽的合成方法，该合成方法反应条件温和、反应效率高、成本低、具有生产利拉鲁肽粗肽产品的广泛应用前景,以用于大规模生产利拉鲁肽。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

1、一种利拉鲁肽的合成方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

(1)以2-Cl-Trt树脂为固相载体，经活化剂和缩合剂的缩合反应，并采用特异性微波技术反应，以Fmoc-保护氨基酸为缩合原料，依次缩合利拉鲁肽氨基酸序列中相对应的氨基酸，其中赖氨酸采用Fmoc-Lys(Dde)-OH，得到Fmoc-利拉鲁肽Ⅰ-2-Cl-Trt树脂，如下式所示：

Fmoc-H(Trt)AE(OtBu)GT(tBu)FT(tBu)S(tBu)D(OtBu)VS(tBu)S(tBu)Y(tBu)LE(OtBu)GQ(Trt)AAK(Dde)E(OtBu)FIAW(Boc)LVR(pbf)GR(pbf)G-2-Cl-Trt树脂；

(2)脱除赖氨酸的侧链保护基Dde，通过固相合成法，在赖氨酸侧链偶联Fmoc-Glu(OtBu)-OH，并在谷氨酸侧链上连接棕榈酸，得到利拉鲁肽Ⅱ-2-Cl-Trt树脂，如下式所示：