[发明专利]一种胶原蛋白海绵的生物相容性检测方法

权利要求书

1.一种胶原蛋白海绵的生物相容性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)胶原蛋白海绵浸提液的制备；

(2)胶原蛋白海绵的无菌检测；

(3)胶原蛋白海绵的细菌内毒素检测；

(4)胶原蛋白海绵的全身急性毒性检测；

(5)胶原蛋白海绵的细胞毒性检测；

(6)胶原蛋白海绵的溶血性试验；

(7)胶原蛋白海绵的皮肤致敏性试验；

(8)胶原蛋白海绵的皮内刺激试验；

(9)胶原蛋白海绵的植入试验；

(10)胶原蛋白海绵的遗传毒性试验；

(11)胶原蛋白海绵的降解检测。

2.根据权利要求1所述的生物相容性检测方法，其特征在于：步骤(1)中，所述浸提液的制备为：将胶原蛋白海绵按0.5-2cm/mL的配比，用生理盐水浸泡24-48小时。

3.根据权利要求1所述的生物相容性检测方法，其特征在于：步骤(4)中，所述全身急性毒性检测为：选用健康小白鼠双数只，体重在17-23g，雌雄各平，平均随机分为实验组和对照组，取浸提液对实验组小白鼠进行腹腔注射，对照组注射生理盐水，上、下午各一次，注射剂量为0.2-0.6mL/10g体重，连续7天，观察其体征情况。

4.根据权利要求1所述的生物相容性检测方法，其特征在于：步骤(5)中，所述细胞毒性检测为：采用MTT比色法检测胶原蛋白海绵的浸提液对成纤维细胞2、4、7天相对增殖率的影响，评价胶原蛋白海绵的细胞毒性。

5.根据权利要求1所述的生物相容性检测方法，其特征在于：步骤(6)中，所述溶血性试验为：取兔心脏血10-20mL，分离红细胞制成体积分数为2％的RBC悬浊液备用；试验分为试品管、阴性对照管和阳性对照管，每组设平行管；试验管为各浓度浸提液对生理盐水的稀释液，阴性对照采用生理盐水，阳性对照采用蒸馏水；各管加入8-20mL相应样品，37℃水溶30-60min后，分别加0.16-0.4mL的RBC悬浊液，37℃水溶1-2h后静置过夜，离心后上清液在520cm处比色。

6.根据权利要求1所述的生物相容性检测方法，其特征在于：步骤(7)中，所述皮肤致敏性试验为：取健康豚鼠双数只，隔日腹腔注射0.15-0.5mL浸提液，连续3次，其中半数豚鼠于首次注射后连续14天由腹腔注射1.5-2.5mL浸提液；另外半数豚鼠于首次注射后21天腹腔注射1.5-2.5mL浸提液；每次注射后观察15分钟，特别是末次注射后有无用抓搔鼻、喷嚏、竖毛、抽搐、呼吸困难、大小便失禁、体温改变、休克、死亡等反应。

7.根据权利要求1所述的生物相容性检测方法，其特征在于：步骤(8)中，所述皮内刺激试验为：以兔子为对象，右侧后肢股四头肌为试验区域，注射1-2mL浸提液，左侧对应部位同法注射等体积的生理盐水作对照，注射48小时、14天、21天分组处死试验兔，解剖取出股四头肌，纵向切开，观察注射部位肌肉组织变化。

8.根据权利要求1所述的生物相容性检测方法，其特征在于：步骤(9)中，所述植入试验为：取雄性昆明小鼠，体重25-30g；无菌条件下，将胶原蛋白海绵制成直径0.5-1cm的原片；小鼠麻醉后固定，背部正中消毒、去毛，剪开约0.7cm左右的纵行切口，将胶原蛋白海绵放入右侧皮下，肠线缝合后，正常饲养；术后3、5、7、9天分别处死后肉眼观察并取材进行常规组织学检查。

9.根据权利要求1所述的生物相容性检测方法，其特征在于：步骤(11)中，所述降解检测为：产品中淀粉在37℃±2℃温度下，置于含有a-淀粉酶和糖化酶的生理盐水中72-96小时后，在a-淀粉酶和糖化酶作用下，转化为葡萄糖，其转化率等于降解率。

10.根据权利要求1所述的生物相容性检测方法，其特征在于，所述生物相容性检测应当符合以下指标：

所述胶原蛋白海绵经Co-60射线灭菌后为无菌；

所述细菌内毒素达到≤0.5EU/mg；

所述胶原蛋白海绵不会引起急性中毒症状；

所述细胞毒性达到≤1级；

所述胶原蛋白海绵不引起溶血反应；

所述胶原蛋白海绵不导致机体过敏反应；

所述胶原蛋白海绵对深部组织无刺激作用，未见明显的炎性反应，不产生明显的组织反应；

所述胶原蛋白海绵在肌肉植入7天后，炎症细胞反应程度≤IV级；植入15天后，炎症细胞反应程度≤III级；植入30天后，炎症细胞反应程度≤II级，且周围无异常反应6周后被吸收；

所述胶原蛋白海绵无遗传毒性。