[发明专利]一种叶酸代谢相关基因突变位点的检测方法及检测试剂盒在审
| 申请号： | 201810818684.4 | 申请日： | 2018-07-24 |
| 公开（公告）号： | CN108977518A | 公开（公告）日： | 2018-12-11 |
| 发明（设计）人： | 王文忠;田军龙;胡军;陈苏平;卜云璇 | 申请（专利权）人： | 为康（苏州）基因科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6858 | 分类号： | C12Q1/6858;C12Q1/6883 |
| 代理公司： | 北京远大卓悦知识产权代理事务所(普通合伙) 11369 | 代理人： | 韩飞 |
| 地址： | 215000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 相关基因 叶酸代谢 突变位点 检测试剂 单碱基延伸引物 多重PCR扩增 目标DNA序列 单碱基延伸 特异性引物 代谢基因 结直肠癌 科研基础 目标片段 遗传状况 质谱分析 样本DNA 有效地 检测 单管 核酸 扩增 筛查 叶酸 突变 个性化 测量 帮助 | ||
1.一种叶酸代谢相关基因突变位点的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
提取样本DNA；
设计用于扩增叶酸代谢相关基因片段的特异性引物；
利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；
设计用于叶酸代谢相关基因片段的单碱基延伸引物；
叶酸代谢相关基因片段单碱基延伸；
核酸质谱分析测量所述目标DNA序列。
2.根据权利要求1所述的叶酸代谢相关基因突变位点的检测方法，其特征在于：所述叶酸代谢相关基因片段包括MTHFR-1片段、MTHFR-2片段、MTRR片段、MTR片段。
3.根据权利要求2所述的叶酸代谢相关基因突变位点的检测方法，其特征在于：所述用于扩增叶酸代谢相关基因片段的特异性引物包括：
用于扩增所述MTHFR-1片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：1，反向引物为SEQID Nos：2；
用于扩增所述MTHFR-2片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：3，反向引物为SEQID Nos：4；
用于扩增所述MTRR片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：5，反向引物为SEQ IDNos：6；
用于扩增所述MTR片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：7，反向引物为SEQ IDNos：8。
4.根据权利要求2所述的叶酸代谢相关基因突变位点的检测方法，其特征在于：所述用于叶酸代谢相关基因片段的单碱基延伸引物包括：
用于所述MTHFR-1片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ ID Nos：61；
用于所述MTHFR-2片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ ID Nos：62；
用于所述MTRR片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ ID Nos：61；
用于所述MTR片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ ID Nos：61。
5.根据权利要求1所述的叶酸代谢相关基因突变位点的检测方法，其特征在于：所述利用单管多重PCR扩增反应包括以下步骤：Taq酶激活，DNA变性。
6.根据权利要求5所述的叶酸代谢相关基因突变位点的检测方法，其特征在于：所述Taq酶激活时温度为95℃。
7.根据权利要求5所述的叶酸代谢相关基因突变位点的检测方法，其特征在于：所述Taq酶激活时间为15分钟。
8.根据权利要求5所述的叶酸代谢相关基因突变位点的检测方法，其特征在于：所述DNA变性时温度为95℃。
9.根据权利要求5所述的叶酸代谢相关基因突变位点的检测方法，其特征在于：DNA变性时间为15秒。
10.一种叶酸代谢相关基因突变位点的检测试剂盒，其特征在于，包括：
用于扩增叶酸代谢相关基因片段的特异性引物，所述特异性引物包括SEQ ID Nos：1、SEQ ID Nos：2、SEQ ID Nos：3、SEQ ID Nos：4、SEQ ID Nos：5、SEQ ID Nos：6、SEQ ID Nos：7、SEQ ID Nos：8；
用于叶酸代谢相关基因片段的单碱基延伸引物，所述单碱基延伸引物包括SEQ IDNos：61、SEQ ID Nos：62。
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