[发明专利]一种叶酸代谢相关基因突变位点的检测方法及检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种叶酸代谢相关基因突变位点的检测方法，包括以下步骤：提取样本DNA；设计用于扩增叶酸代谢相关基因片段的特异性引物；利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；设计用于叶酸代谢相关基因片段的单碱基延伸引物；叶酸代谢相关基因片段单碱基延伸；核酸质谱分析测量目标DNA序列，能够有效地对结直肠癌患者展开叶酸相关代谢基因突变筛查，帮助个体充分了解自己的遗传状况，为此类患者开展个性化精准诊治奠定临床及科研基础。本发明还涉及一种叶酸代谢相关基因突变位点的检测试剂盒。

技术领域

本发明涉及生物医学领域，尤其是涉及一种叶酸代谢相关基因突变位点的检测方法及检测试剂盒。

背景技术

参与叶酸代谢最重要的三个基因是亚甲基四氢叶酸还原酶基因(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶还原酶基因(MTRR)和甲硫氨酸合成酶(MTR)。研究发现，MTHFR的活性与C677T和A1298C基因位点有关；MTRR的活性与A66G基因位点有关；MTR活性与A2756G基因位点有关。当基因位点发生突变时就会导致MTHFR、MTRR和MTR活性下降，进而引起叶酸利用能力不足。

中国人群中存在一定比例的风险型基因——78％的国人存在叶酸利用能力相关基因突变，导致不同人对叶酸的利用能力不同，所以叶酸补充需要个性化。

因缺乏精准的、高通量的基因突变筛查技术，进而阻碍了精准治疗药物的研发及临床研究。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种叶酸代谢相关基因突变位点的检测方法和检测试剂盒。

本发明的目的采用以下技术方案实现：

一种叶酸代谢相关基因突变位点的检测方法，包括以下步骤：提取样本DNA；设计用于扩增叶酸代谢相关基因片段的特异性引物；利用单管多重PCR扩增反应得到目标片段；设计用于叶酸代谢相关基因片段的单碱基延伸引物；叶酸代谢相关基因片段单碱基延伸；核酸质谱分析测量所述目标DNA序列。

进一步地，所述叶酸代谢相关基因片段包括MTHFR-1片段、MTHFR-2片段、MTRR片段、MTR片段。

进一步地，所述用于扩增叶酸代谢相关基因片段的特异性引物包括：用于扩增所述MTHFR-1片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：1，反向引物为SEQ ID Nos：2；用于扩增所述MTHFR-2片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：3，反向引物为SEQ ID Nos：4；用于扩增所述MTRR片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：5，反向引物为SEQ IDNos：6；用于扩增所述MTR片段的特异性引物，正向引物为：SEQ ID Nos：7，反向引物为SEQID Nos：8。

进一步地，所述用于叶酸代谢相关基因片段的单碱基延伸引物包括：用于所述MTHFR-1片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ ID Nos：61；用于所述MTHFR-2片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ ID Nos：62；用于所述MTRR片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ ID Nos：61；用于所述MTR片段的单碱基延伸引物，序列为SEQ ID Nos：61。

进一步地，所述利用单管多重PCR扩增反应包括以下步骤：Taq酶激活，DNA变性。

进一步地，所述Taq酶激活时温度为95℃。

进一步地，所述Taq酶激活时间为15分钟。

进一步地，所述DNA变性时温度为95℃。

进一步地，DNA变性时间为15秒。