[发明专利]一种溶磷降镉微生物菌剂及其制备方法

权利要求书

1.一种兼具溶磷降镉作用的微生物菌剂的制备方法，其特征在于：按重量份计，复合菌剂25重量份、载体75重量份；

其中，所述复合菌剂中含有甲基营养型芽孢杆菌35亿cfu/g、罗尔斯通氏菌7.5亿cfu/g、淡紫拟青霉7.5亿cfu/g，总有效活菌数≥50.0亿cfu/g；

所述载体为草炭、硅藻土经干燥过筛处理的粉状物；

所述载体中草炭、硅藻土的用量比为1：1；

溶磷降镉微生物菌剂，包括以下制备步骤：

(1)制备载体；

(2)制备复合菌剂；

(3)将所述载体与复合菌剂按比例混合均匀，得到溶磷降镉微生物菌剂；

所述载体的制备方法包括以下步骤：

(1)将草炭、硅藻土按重量比例1：1用粉碎机粉碎，得到预混料；

(2)将预混料烘干、破碎、过筛，即得到载体；

所述复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备甲基营养型芽孢杆菌混合芽孢粉；

(2)制备罗尔斯通氏菌菌粉；

(3)制备淡紫拟青霉孢子粉；

(4)将上述制得的甲基营养型芽孢杆菌混合芽孢粉、罗尔斯通氏菌菌粉、淡紫拟青霉孢子粉按比例混合，即得复合菌剂；

所述甲基营养型芽孢杆菌混合芽孢粉的制备步骤为：

a.斜面培养：将甲基营养型芽孢杆菌原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，35℃条件下培养24-48h；

b.摇床培养：将步骤a培养的斜面菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，35℃、160r/min条件下培养14-18h；

c.发酵罐培养：将步骤b培养好的种子液在无菌条件下接种于液体发酵培养基中，在pH7.0、罐压0.05～0.06MPa、35～37℃、通风量1：0.4～0.6vvm的条件下，培养48-56h后，检测活菌数大于5.0×10⁹cfu/mL，80％菌体为芽孢时，下罐，得到发酵液备用；

d.将步骤c中得到的发酵液按等重量比混合玉米淀粉，经过浓缩干燥制备成甲基营养型芽孢杆菌芽孢粉；

所述罗尔斯通氏菌菌粉的制备步骤为：

(a).斜面培养：将罗尔斯通氏菌原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，35℃条件下培养24-48h；

(b).摇床培养：将步骤(a)培养的斜面菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，35℃、160r/min条件下培养14-18h；

(c).发酵罐培养：将步骤(b)培养好的种子液在无菌条件下接种于液体发酵培养基中，在pH6.8-7.0、罐压0.05～0.06MPa、35℃、通风量1：0.8～1.1vvm的条件下，培养48-56h后，检测活菌数大于2.0×10⁹cfu/mL时，下罐，得到发酵液备用；

(d).将步骤(c)中得到的发酵液按等重量比混合玉米淀粉，经过浓缩干燥制备成罗尔斯通氏菌菌粉；

所述淡紫拟青霉孢子粉的制备步骤为：

A.斜面培养：将淡紫拟青霉原始菌种在无菌条件下接种于斜面培养基上，在28℃条件下培养72小时；

B.摇床培养：将步骤A培养的菌种在无菌条件下接种于种子培养基中，在pH6.0-6.5、26℃条件下，160r/min摇床培养24小时；

C.发酵罐培养：将步骤B培养的菌种在无菌条件下分别接种于液体发酵培养基，在pH6.0-7.0、罐压0.05～0.06MPa、26℃、通风量为1:0.6～0.8vvm，在培养72小时后，菌丝体占总体积的20％时终止发酵，进行固体发酵产孢；

D.固体发酵产孢：将步骤C经过发酵罐培养后的菌丝体接种到固体发酵培养基上，培养168-180小时，待淡紫拟青霉90％产孢时停止发酵；

E.将步骤D中得到的固体发酵产物浓缩干燥制备成淡紫拟青霉孢子粉。