[发明专利]一种透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束及其制备方法

权利要求书

1.一种透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，将透明质酸与甲氨蝶呤通过含有二硫键的胱胺链接，再经透析法制备得到透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束。

2.根据权利要求1所述的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，透明质酸、甲氨蝶呤及胱胺的反应摩尔比为(1～3)：1：1。

3.根据权利要求1所述的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)胱胺-甲氨蝶呤体系的合成

将甲氨蝶呤溶于无水甲酰胺中，加入EDC和NHS，搅拌、避光活化处理1～5h，得到活化后的甲氨蝶呤溶液，然后向活化后的甲氨蝶呤溶液中加入胱胺，避光反应处理3～10h，合成得到胱胺-甲氨蝶呤体系；

2)透明质酸-SS-甲氨蝶呤体系的合成

将透明质酸溶解于无水甲酰胺中，加入EDC和NHS，搅拌、活化处理5h，得到活化后的透明质酸溶液，将该活化后的透明质酸溶液滴加到步骤1)制得的胱胺-甲氨蝶呤体系中，避光反应15～40h，得到透明质酸-SS-甲氨蝶呤体系；

3)自组装纳米胶束的形成

将透明质酸-SS-甲氨蝶呤体系置于透析袋中透析处理20～48h，定期换水，透析完成后离心去除未连接上的透明质酸，然后加水超声处理，再经冷冻干燥处理，制得透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束。

4.根据权利要求3所述的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，步骤1)中，甲氨蝶呤与无水甲酰胺的用量比为(1～15)mg：1mL；EDC、NHS与甲氨蝶呤的摩尔比为(1～4)：(2.5～10)：(1～1.5)。

5.根据权利要求3所述的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，步骤2)中，透明质酸与无水甲酰胺的用量比为(20～50)mg：1mL；EDC、NHS和透明质酸的摩尔比为(0.8～2):(0.2～0.6)：1。

6.根据权利要求3所述的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，步骤3)中，透析选用截留分子量为2000Da的透析袋，透析处理期间，每隔2h更换一次去离子水。

7.根据权利要求3所述的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，步骤3)中，离心是将透析后的胶束溶液在6000～9000R的转速下离心处理10～20min。

8.根据权利要求1～7中任意一项所述的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束的制备方法，其特征在于，所用透明质酸的分子量为2000～8000。

9.采用权利要求1～8中任意一项所述的制备方法制得的透明质酸-甲氨蝶呤自组装纳米胶束。