[发明专利]一种龟龄集UPLC指纹图谱的构建方法及其应用

权利要求书

1.一种龟龄集UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

a、供试品溶液的制备

取龟龄集胶囊内容物，加甲醇超声提取，摇匀后以3500r/min离心20min，取上清液，蒸干甲醇，加水30mL溶解残渣，以沸点为60-90℃石油醚萃取，合并石油醚层，蒸干溶剂后以色谱纯甲醇溶解，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

b、对照品溶液的制备

精密称取补骨脂素、新补骨脂异黄酮、齐墩果酸对照品并溶于甲醇，作为对照品溶液；

c、色谱条件

分别精密吸取步骤a制备的供试品溶液和步骤b制备的对照品溶液2-5μL，以乙腈-水为流动相，以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱进行梯度洗脱，柱温为25-35 ℃，流速为0.1-0.3 mL/min，检测波长为203 nm，得到供试品和对照品UPLC图谱；

d、采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，对供试品溶液和对照品溶液的UPLC图谱进行数据匹配，得到标准指纹图谱；

所述步骤c中梯度洗脱条件为：

0-10 min，乙腈与水的体积比由30%：70%到52%：48%；

10-15 min，乙腈与水的体积比为52%：48%；

15-26 min，乙腈与水的体积比由52%：48%到87%：13%；

26-30 min，乙腈与水的体积比为87%：13%；

30-35 min，乙腈与水的体积比由87%：13%到100%：0%；

35-38 min，乙腈与水的体积比由100%：0%到30%：70%。

2.根据权利要求1所述的龟龄集UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤a中甲醇加入量为每克龟龄集中加入50ml甲醇；所述步骤a中超声提取时间为至少30min。

3.根据权利要求1所述的龟龄集UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述步骤a中以沸点为60-90℃石油醚萃取，需萃取三次，每次10 ml。

4.根据权利要求1所述的龟龄集UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于：所述龟龄集UPLC指纹图谱中有19个共有峰，其中峰1为补骨脂素，峰3为新补骨脂异黄酮，峰13为齐墩果酸，以11号峰为参照峰，相对保留时间：（1）0.226 min、（2）0.240 min、（3）0.414 min、（4）0.525 min、（5）0.542 min、（6）0.593 min、（7）0.732 min、（8）0.794 min、（9）0.899 min、（10）0.907 min、（11）S峰、（12）1.056 min、（13）1.086 min、（14）1.114 min、（15）1.127min、（16）1.142 min、（17）1.171 min、（18）1.219 min、（19）1.241 min。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的龟龄集UPLC指纹图谱构建方法的应用，其特征在于：所述龟龄集UPLC指纹图谱可用于龟龄集品质评价和质量控制。