[发明专利]一种龟龄集UPLC指纹图谱的构建方法及其应用

说明书

本发明公开了一种龟龄集UPLC指纹图谱的构建方法及其应用，属于中药技术领域，选择补骨脂素、新补骨脂异黄酮、齐墩果酸为对照品，精密吸取供试品溶液、对照品溶液各2‑5μL，分别注入超高效液相色谱仪进行分析，色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，柱温25‑35℃，流速0.1‑0.3mL/min，检测波长203nm，流动相采用乙腈和水梯度洗脱，得到龟龄集UPLC指纹图谱。本发明建立的龟龄集指纹图谱能够较全面的反映龟龄集的物质信息，精密度高、重现性好，可准确有效评价和控制龟龄集的质量。

技术领域

本发明涉及中药指纹图谱的构建方法，特别涉及一种龟龄集UPLC指纹图谱的构建方法，及其在龟龄集质量监控方面的应用。

背景技术

龟龄集由红参、鹿茸、海马、枸杞子、丁香、穿山甲、雀脑、牛膝、锁阳、熟地黄、补骨脂、菟丝子、杜仲、石燕、肉苁蓉、甘草、天冬、淫羊藿、大青盐、砂仁等28味药材经炮制、升炼制成的中药大复方（中华人民共和国药典，2015版，985页）。其组方庞大，成分复杂，为保持这一中药大复方不同批次产品具有稳定的功效，就必须制定严格的企业内控质量标准。2015版《中国药典》规定龟龄集的质量控制标准包括：显微鉴别砂仁、鹿茸、穿山甲、海马；薄层鉴别淫羊藿苷和补骨脂素；含量测定项中每粒（0.3g）含红参以人参皂Rg₁、人参皂苷Re的总量计，不得少于60 μg。因龟龄集成分复杂，其中任何一种药材均不能评价整体复方的质量，一个或几个化学成分则更不能够准确评价复方的质量。现行质量控制标准并不能反映复方的整体质量。

从整体上综合分析评价龟龄集方可提升复方质量均一性，故可利用高效液相色谱建立龟龄集的指纹图谱，综合反映不同生产批次龟龄集主要成分差异，为龟龄集内在质量特征评价和等级分类提供科学依据。目前，关于龟龄集的高效液相色谱指纹图谱研究尚未见文献报道，为保障患者用药安全有效，本发明建立了一种适用于龟龄集质量控制的指纹图谱检测方法。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种龟龄集UPLC指纹图谱的构建方法及其应用，该方法可以客观、全面、准确的评价龟龄集的质量，具有方法简单、操作方便、耗时短的优势，对控制龟龄集的内在质量具有重要意义。

本发明采用的技术方案是：一种龟龄集UPLC指纹图谱的构建方法，包括以下步骤：

a、供试品溶液的制备

取龟龄集胶囊内容物，加甲醇超声提取，摇匀后以3500r/min离心20min，取上清液，蒸干甲醇，加水30mL溶解残渣，以沸点为60-90℃石油醚萃取，合并石油醚层，蒸干溶剂后以色谱纯甲醇溶解，0.22μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；

b、对照品溶液的制备

精密称取补骨脂素、新补骨脂异黄酮、齐墩果酸对照品并加甲醇配置成含补骨脂素0.167 mg/mL、新补骨脂异黄酮 0.185 mg/mL、齐墩果酸0.196 mg/mL的对照品溶液；

c、色谱条件

分别精密吸取步骤a制备的供试品溶液和步骤b制备的对照品溶液2-5μL，以乙腈-水为流动相，以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱进行梯度洗脱，柱温为25-35 ℃，流速为0.1-0.3 mL/min，检测波长为203 nm，得到供试品和对照品UPLC图谱；

d、采用国家药典委员会制定的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件，对供试品溶液和对照品溶液的UPLC图谱进行数据匹配，得到标准指纹图谱。

进一步地，所述步骤a中甲醇加入量为每克龟龄集中加入50ml甲醇；所述步骤a中超声提取时间为至少30min。

进一步地，所述步骤a中以沸点为60-90℃石油醚萃取，需萃取三次，每次10 ml

进一步地，所述步骤c中梯度洗脱条件为：