[发明专利]一种箦藻无菌苗的组织培养方法

权利要求书

1.一种箦藻无菌苗的组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)配制初代培养基和增殖培养基，灭菌待用；

(2)外植体的清洗与消毒：以箦藻的健康、无病虫害的植株作为外植体，洗净后依次经酒精、0.1％升汞溶液消毒，再用无菌水洗净待用；

(3)将消毒后的外植体用灭菌纸片吸掉表面水分，转接入初代培养基，然后向组培瓶中倒入30-60ml冷却后的无菌水，使外植体沉没于无菌水中，置于培养箱中诱导培养4周；

(4)分离初代培养基中的外植体和产生的新芽，一起转入增殖培养基中，倒入30-60ml冷却后的无菌水，淹没新的外植体和新芽，增殖培养4周；

(5)将带有完整根系的箦藻植株取出，清水冲洗后移栽到模拟的自然水体中培养。

2.根据权利要求1所述的一种箦藻无菌苗的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中初代培养基为MS培养基、B5培养基、White培养基、N6培养基中的任一种。

3.根据权利要求2所述的一种箦藻无菌苗的组织培养方法，其特征在于，所述初代培养基中添加初代培养激素为6BA 和萘乙酸，所述6BA 的添加浓度为0.5-1.5mg/L，所述萘乙酸的添加浓度为0.1-0.5mg/L。

4.根据权利要求1所述的一种箦藻无菌苗的组织培养方法，其特征在于，所述增殖培养基为MS培养基、B5培养基、White培养基、N6培养基中的任一种。

5.根据权利要求4所述的一种箦藻无菌苗的组织培养方法，其特征在于，所述增殖培养基中添加增殖培养激素为激动素和萘乙酸，所述激动素的添加浓度为0.5-2mg/L，所述萘乙酸的添加浓度为0.1-0.5mg/L。

6.根据权利要求1所述的一种箦藻无菌苗的组织培养方法，其特征在于，外植体在清洗与消毒之前先对外植体进行叶片去除处理，留下芽心附近的8-12只叶片。

7.根据权利要求1所述的一种箦藻无菌苗的组织培养方法，其特征在于，所述步骤(2)中外植体的清洗与消毒具体方法为：流水冲洗外植体20-40min，75％酒精消毒15-40s，冲洗3次；0.1％升汞溶液消毒5-20min，再用无菌水冲洗5次。

8.根据权利要求1所述的一种箦藻无菌苗的组织培养方法，其特征在于，步骤(3)中初代培养条件为：无菌环境，光照2500Lux，光照周期为12h/d，温度23-27℃。

9.根据权利要求1所述的一种箦藻无菌苗的组织培养方法，其特征在于，步骤(4)中增殖培养条件为：无菌环境，光照2500Lux，光照周期为12h/d，温度23-27℃。