[发明专利]一种箦藻无菌苗的组织培养方法

说明书

本发明涉及一种箦藻无菌苗的组织培养方法，包括如下步骤：(1)配制初代培养基和增殖培养基，灭菌待用；(2)外植体的清洗与消毒；(3)将消毒后的外植体用灭菌纸片吸掉表面水分，转接入初代培养基，然后向组培瓶中倒入30‑60ml冷却后的无菌水，使外植体沉没于无菌水中，置于培养箱中诱导培养4周；(4)分离初代培养基中的外植体和产生的新芽，一起转入增殖培养基中，倒入30‑60ml冷却后的无菌水，淹没新的外植体和新芽，增殖培养4周；(5)将带有完整根系的箦藻植株取出，清水冲洗后移栽到模拟的自然水体中生根培养。该方法可不受季节、温度、地域影响获得大量的新植株，新植株生根率达100％，成活率高，可快速建立箦藻无菌繁殖体系。

技术领域

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及一种箦藻无菌苗的组织培养方法。

背景技术

箦藻又叫水筛，是一种较常用的观赏水草。箦藻为沉水草本植物，与轮叶黑藻同属水鳖科，单子叶植物。箦藻叶色美丽，是水族箱内沉水植物的重要布置材料，也是园林水景中的良好绿化材料。箦藻拥有细瘦的白色花瓣，适合种植在平坦的水族箱的前景区域，但由于箦藻属于阳性草，对光、CO₂、水质以及水深有严格的要求，稍有不慎可能导致植物枯死、落叶等现象，因此其种植难度极高，需强烈光照度和极软的软水环境，不能在水质硬度太高及偏碱性的水中正常生长；光线不足时也会出现落叶现象。因此在水族领域箦藻繁殖不易，是栽培难度较高的水草种类之一，不易繁殖的属性也让很多爱好者望而却步。

目前尚缺乏成熟的技术用于大规模繁殖优质的箦藻工程苗，同时使箦藻苗克服该物种对环境要求高、难繁殖的问题。

发明内容

为了克服现有技术的上述不足，本发明提出了一种箦藻无菌苗的组织培养方法，该方法是在无菌条件下，采取适宜培养环境、给予固定光照，诱导箦藻新的幼苗，逐步形成无菌苗体系，后期可常年提供大量无菌幼苗。该方法易行，操作方便，产量高，克服了水族缸中不易繁殖、植物种苗获得困难的问题。

为了达到上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的：

一种箦藻无菌苗的组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)配制初代培养基和增殖培养基，灭菌待用；

(2)外植体的清洗与消毒：以箦藻的健康、无病虫害的植株作为外植体，洗净后依次经酒精、0.1％升汞溶液消毒，再用无菌水洗净待用；

(3)将消毒后的外植体用灭菌纸片吸掉表面水分，转接入初代培养基，然后向组培瓶中倒入30-60ml冷却后的无菌水，使外植体沉没于无菌水中，置于培养箱中诱导培养4周；

(4)分离初代培养基中的外植体和产生的新芽，一起转入增殖培养基中，倒入30-60ml冷却后的无菌水，淹没新的外植体和新芽，增殖培养4周；

(5)将带有完整根系的箦藻植株取出，清水冲洗后移栽到模拟的自然水体中培养。

进一步地，所述步骤(1)中初代培养基为MS培养基、B5培养基、White培养基、N6培养基中的任一种。

更进一步地，所述初代培养基中添加初代培养激素为6氨基嘌呤和萘乙酸，所述6氨基嘌呤的添加浓度为0.5-1.5mg/L，所述萘乙酸的添加浓度为0.1-0.5mg/L。

进一步地，所述增殖培养基为MS培养基、B5培养基、White培养基、N6培养基中的任一种。

更进一步地，所述增殖培养基中添加增殖培养激素为激动素和萘乙酸，所述激动素的添加浓度为0.5-2mg/L，所述萘乙酸的添加浓度为0.1-0.5mg/L。

进一步地，外植体在清洗与消毒之前先对外植体进行叶片去除处理，留下芽心附近的8-12只叶片。