[发明专利]一种人外周血源性早期内皮祖细胞的培养方法

权利要求书

1.一种人外周血源性早期内皮祖细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将磷酸盐缓冲液和外周静脉血混匀，得到稀释的血液；

S2：把稀释的血液加到淋巴细胞分离液上，不要混匀；

S3：以400～500g离心40～50分钟，温度控制在18℃～20℃；

S4：除去血浆部分，取出单个核细胞层，将单个核细胞层与磷酸盐缓冲液混匀；

S5：以400～500g离心10～20分钟，温度控制在18℃～20℃，弃上清，并用15～20mL磷酸盐缓冲液重悬细胞；

S6：以400～500g离心10～20分钟，温度控制在18℃～20℃，弃上清，即得单个核细胞；

S7：将获得的单个核细胞用EBM完全培养基重悬，调整细胞密度后，放置于人纤维黏连蛋白包被的细胞培养瓶，放入培养箱中，在培养的第2～3天，加入黄芪多糖和山苦茶多糖；培养至4～5天，即得早期内皮祖细胞；

在培养箱内培养的条件为：培养的24h内，保持氧浓度为3％，二氧化碳浓度为3.5％，培养的第2～3天，保持氧浓度为10％，二氧化碳浓度为4.5％，培养至第4天，保持与室内氧浓度及二氧化碳浓度相同。

2.根据权利要求1所述的人外周血源性早期内皮祖细胞的培养方法，其特征在于，步骤S1中，磷酸盐缓冲液和外周静脉血的体积比为1:1。

3.根据权利要求1所述的人外周血源性早期内皮祖细胞的培养方法，其特征在于，步骤S2中，稀释的血液与淋巴细胞分离液的体积比为4：3。

4.根据权利要求1所述的人外周血源性早期内皮祖细胞的培养方法，其特征在于，步骤S4中，单个核细胞层与磷酸盐缓冲液的体积比为1:3。

5.根据权利要求1所述的人外周血源性早期内皮祖细胞的培养方法，其特征在于，步骤S7中，调整后细胞密度为1×10⁷个/mL。

6.根据权利要求1所述的人外周血源性早期内皮祖细胞的培养方法，其特征在于，黄芪多糖的浓度为1.2μg/mL，山苦茶多糖的浓度为1.0μg/mL。