[发明专利]鉴别何首乌和棱枝何首乌的分子特异性标记引物及方法

说明书

本发明公开了鉴别何首乌和棱枝何首乌的分子特异性标记引物及方法。本发明利用分子特异性标记引物的上游引物FMF：5’‑ATGTTTTCCATACCTTACCCACT‑3’；下游引物FMR：5’‑TTTCATCATTTTTATTCTCTCCG‑3’，通过常规的PCR方法可对两个相似物种何首乌F.multiflora和棱枝何首乌F.multiflora var.angulata进行快速分子鉴定，如果扩增产物中含有191bp片段，为或候选为何首乌，如果扩增产物中不含有191bp片段，为或候选为棱枝何首乌。此方法简单，时间短，可有效、快速地鉴别何首乌F.multiflora和棱枝何首乌F.multiflora var.angulata。

技术领域

本发明涉及一种分子特异性标记引物，具体是鉴别何首乌和棱枝何首乌的分子特异性标记引物及方法。

背景技术

何首乌Fallopia multiflora和棱枝何首乌Fallopia multiflora var.angulata均属于蓼科 Polygonaceae何首乌属Fallopia植物。何首乌是中国传统常用中药材，具有解毒截疟、润肠通便等功效；具有抗氧化、抗衰老、抗炎、抗肿瘤、降低胆固醇、保肝等药理作用。棱枝何首乌作为何首乌的变种，两者相似之处在于地下器官结构都是具有纺锤形和团块状的块根，均具有异常维管束；不同之处在于棱枝何首乌的异常维管束多，有木心。药材市场上常出现何首乌近缘种冒充何首乌的现象，如棱枝何首乌Fallopia multifloravar.angulata、毛脉蓼Fallopia multiflora var.ciliinervis、齿叶蓼Fallopiadenticulata、翼蓼Pteroxygonum giraldii Damm.et Diels等。其中，只有棱枝何首乌与何首乌在形态和化学成分上相似，尤其加工制成制首乌后，原植物形态破坏，传统鉴别难以区分。分子鉴别具有客观，时间短等优点。两者在分子结构上有很大区别，这一结论已得到分子数据的支持。

目前人们主要通过传统的宏观鉴别方法鉴别何首乌与棱枝何首乌这两个相似种证据不足，主观性强，因而，仅仅依靠外观的判断很难将二者辨别出来。此外，也有采用核糖体DNA内转录间隔区的ITS和matK、trnL-F、rbcl和psbA-trnH等叶绿体基因鉴别何首乌及其近缘种之间的关系，但是，基于位点特异性PCR技术鉴别何首乌与棱枝何首乌未见报道。研究表明二者在分子结构上具有很大区别。因此，在何首乌分类研究上，分子标记技术成为了对何首乌辅助鉴别的重要手段。

psbA-trnH片段是位于叶绿体DNA基因组上psbA和trnH基因之间的一段长约300bp的非编码序列，不仅适合于属内物种间的系统发育分析，而且非常适合于植物物种的分子鉴定。对何首乌和棱枝何首乌的psbA-trnH区序列测序结果显示，何首乌和棱枝何首乌的psbA-trnH序列长度均为396bp。因此，很难利用psbA-trnH序列的简单PCR扩增、普通电泳对两个相似种进行准确鉴别。通过对两个相似种的psbA-trnH序列比对分析发现二者的局部序列存在碱基差异，本发明根据这一特点，设计了用于鉴定何首乌的psbA-trnH特异性标记引物。本发明为两个相似种的分子辅助鉴别提供了可能性，对有效的鉴别和保护何首乌种质资源具有非常重要的意义，为临床安全用药提供有效依据。

发明内容

本发明的目的在于提供一种鉴别何首乌和棱枝何首乌的分子特异性标记引物及方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

鉴别何首乌和棱枝何首乌的分子特异性标记引物，所述分子特异性标记引物的核苷酸序列如下：

上游引物FMF：5’-ATGTTTTCCATACCTTACCCACT-3’；

下游引物FMR：5’-TTTCATCATTTTTATTCTCTCCG-3’。