[发明专利]一种制备分子生物级牛血清白蛋白的方法

权利要求书

1.一种制备分子生物级牛血清白蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)吸附剂用缓冲液重悬并洗涤3次后，在缓冲液中分散均匀，得到吸附剂分散液，在4℃条件下储存备用；其中，所述吸附剂是具有多孔结构的吸附性材料，所述具有多孔结构的吸附性材料为硅藻土或高岭土；

(2)将牛血清白蛋白样品溶解在缓冲液中形成样品分散液，然后加入吸附剂分散液，搅拌后分离并收集上清液；

(3)将上清液与吸附剂分散液混合，搅拌后分离并收集上清液，重复两次；将收集的上清液用膜过滤后，得到牛血清白蛋白纯化液1；

(4)用肝素-琼脂糖(Heparin-Sepharose)层析柱对步骤(3)得到的牛血清白蛋白纯化液1进行纯化，收集穿透峰，得到牛血清白蛋白纯化液2；

(5)采用分子截留量为10KD的超滤浓缩管对牛血清白蛋白纯化液2进行超滤浓缩，得到超滤牛血清白蛋白样品3；

(6)将超滤牛血清白蛋白样品3采用分子截留量为14000Da的透析袋4℃条件下搅拌透析2-3h后，更换透析液透析过夜，即得分子生物级牛血清白蛋白。

2.根据权利要求1所述的制备分子生物级牛血清白蛋白的方法，其特征在于，所述缓冲液是Tris-HCl缓冲溶液、磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲溶液中的一种或多种，浓度为10mM-100mM，pH为5-9。

3.根据权利要求2所述的制备分子生物级牛血清白蛋白的方法，其特征在于，所述缓冲液的浓度为40-60mM，pH为7.5-8.5。

4.根据权利要求3所述的制备分子生物级牛血清白蛋白的方法，其特征在于，所述缓冲液为Tris-HCl缓冲溶液，浓度为50mM，pH为7.8。

5.根据权利要求1所述的制备分子生物级牛血清白蛋白的方法，其特征在于，步骤(1)中吸附剂与缓冲液的比例为1:1-1:20w/v。

6.根据权利要求1所述的制备分子生物级牛血清白蛋白的方法，其特征在于，步骤(2)中牛血清白蛋白样品与缓冲液的比例为1:1-1:10w/v；样品分散液与吸附剂分散液的体积比为1:1-1:10。

7.根据权利要求1所述的制备分子生物级牛血清白蛋白的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的搅拌在4℃进行30min，所述分离是在10000rpm离心10min。

8.根据权利要求1所述的制备分子生物级牛血清白蛋白的方法，其特征在于，肝素-琼脂糖(Heparin-Sepharose)层析柱使用前用平衡液进行平衡，所述平衡液为Tris-HCl缓冲溶液、磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲溶液中的一种或多种，浓度为10mM-100mM，pH为5-9。

9.根据权利要求1所述的制备分子生物级牛血清白蛋白的方法，其特征在于，透析使用的透析液为Tris-HCl缓冲溶液、磷酸盐缓冲液、HEPES缓冲溶液中的一种或多种，浓度为10mM-100mM，pH为5-9。