[发明专利]三角枫的组织培养方法

说明书

本发明公开了一种三角枫的组织培养方法，包括筛选茎段、叶片培养最佳的消毒方案、筛选最适宜三角枫茎段萌芽生长的启动培养基、筛选最适宜三角枫生根培养基等步骤。本发明的三角枫的组培方法具有污染率低、启动效果高、繁殖率高、组培苗健壮等优点；与现有技术相比，启动培养的嫩梢诱导率提高了60％，完成了增殖生根组培苗生产全过程。

技术领域

本发明涉及植物组培方法，尤其涉及一种三角枫的组织培养方法。

背景技术

三角枫(Acer buergerianum)属槭树科(Aceraceae)槭树属(Acer)落叶乔木，别名三角槭。春叶嫩红，秋叶暗红或橙红，观赏效果颇佳，常以桩景树、庭荫树的形式出现在园林景观中，是我国优良的乡土树种之一。三角枫可做为彩叶树种推广，具有广阔的发展前景。

随着组培技术的发展，组培为三角枫的快速繁殖和工厂化生产提供了一条有效途径。目前国内三角枫的繁殖方式主要以播种为主。播种繁殖周期长且性状分离严重，长势参差不齐，不利于工厂化、产业化。利用离体培养可以快速繁殖优良单株，且保持树体稳定性，还可以缩短培育年限，打破季节的限制，能够大大提高三角枫的生产速率。

国内学者对槭属植物主要集中在五角枫、美国红枫、鸡爪槭等的组培快繁研究，但对于三角枫组培快繁研究报道却寥寥无几。对于三角枫的快繁，目前李彬等研究了其嫁接和扦插技术。对于三角枫的组织培养技术，刘玉民等研究了其愈伤组织，以MS为基本培养基，用2，4-D、NAA、6-BA、IBA做激素，发现诱导愈伤组织的最佳激素组合为6-BA1mg·L^-1+NAA0.5mg·L^-1+IBA0.5mg·L^-1，最适宜的温度为25℃左右。

但是目前还没有关于三角枫组培试验生根的报道。同属组培试验成功的案例中所用的基本培养基有WPM，MS，NN69等几种，激素有IBA，6-BA，NAA，IAA，TDZ等。除此之外，在培养过程中，关于光照强度，光照时长，温度等因素也对外植体的生长有所影响。

发明内容

发明目的：本发明提供了一种三角枫的组织培养方法，填补了关于三角枫组培试验生根技术的空缺，解决了现有技术中心三角枫播种繁殖周期长且性状分离严重，长势参差不齐，不利于工厂化、产业化的问题。

技术方案：本发明的三角枫的组织培养方法，包括以下步骤：

(1)外植体的采集，于3-5月份晴天的中午，采集当年生枝条的中上部带腋芽茎段。

(2)外植体预处理，将步骤(1)中采集的的枝条剪成1-2cm带腋芽的茎段，叶片修剪成方形，并将修剪的茎段和叶片放入洗衣粉的饱和溶液中浸泡10-20min，优选15min，后用自来水冲洗干净，然后再将茎段和叶片放入农药中浸泡7-12min，优选10min，后并用流水冲洗1.5-2.5h，优选2h。

(3)茎段表面消毒，将步骤(2)中冲洗完毕的外植体转入超净工作台进行进一步的消毒处理，消毒处理完成后，然后将外植体沥干水分，并对其两端进行适当的修剪，并形态学朝上接种在供试培养基上。

(4)叶片表面消毒，将步骤(2)中预处理好的叶片转入超净工作台进一步的消毒处理，沥干水后，然后将叶片适当修剪并垂直于叶片的叶脉进行刻伤，背面紧贴培养基接入；

(5)启动培养，将步骤(3)经过消毒灭菌的外植体两端切口处修剪成1-1.5cm的单芽茎段，直立式接种于启动培养基上；

(6)茎段处理，选择L9(34)的正交设计，设置3个因素，每个因素3个水平，每种处理均加入7.1g·L^-1琼脂，30g·L^-1蔗糖，并控制PH 5-6.5；优选5.8。