[发明专利]分泌鼠毒素的鼠疫菌质粒缺失突变株在制备天然鼠毒素中的应用在审
| 申请号： | 201810840671.7 | 申请日： | 2018-07-27 |
| 公开（公告）号： | CN108949868A | 公开（公告）日： | 2018-12-07 |
| 发明（设计）人： | 王效义;周亚洲;范艳晓;汪琼;纪宇欣;李璐;杨瑞馥 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 |
| 主分类号： | C12P21/00 | 分类号： | C12P21/00;C07K1/22;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京尚诚知识产权代理有限公司 11322 | 代理人： | 谢弘;鲁兵 |
| 地址： | 100071 北京市丰台区东*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 毒素 鼠疫菌 制备 质粒缺失 突变株 质粒 分泌 生物学活性 毒素蛋白 亲和层析 提取纯化 培养基 沉淀 应用 | ||
1.鼠疫菌突变株在制备鼠毒素蛋白中的应用，所述鼠疫菌突变株含有pMT1质粒且缺失了pPCP1质粒。
2.如权利要求1所述的应用，其中，所述鼠疫菌突变株为分别被命名为pCD1+pMT1+pCRY(缺失了pPCP1)、pCD1+pMT1(缺失了pCRY和pPCP1)、pMT1+pCRY(缺失了pCD1和pPCP1)和pMT1(缺失了PCP1、pCD1和pCRY)中的一种。
3.一种制备鼠毒素蛋白的方法，其包括如下步骤：
获得鼠疫菌突变株，其含有pMT1质粒且缺失了pPCP1质粒；
将鼠疫菌突变株置于培养基中培养至对数生长期，从培养物收集上清，将上清沉淀得到鼠毒素粗蛋白后，通过亲和层析的方法来提取纯化鼠毒素蛋白。
4.如权利要求3所述的方法，其中，所述鼠疫菌突变株为分别被命名为pCD1+pMT1+pCRY(缺失了pPCP1)、pCD1+pMT1(缺失了pCRY和pPCP1)、pMT1+pCRY(缺失了pCD1和pPCP1)和pMT1(缺失了PCP1、pCD1和pCRY)中的一种。
5.如权利要求3或4所述的方法，其中，所述培养基为LB培养基或TMH培养基。
6.如权利要求3至5中任一项所述的方法，其中，所述上清用40％饱和硫酸铵沉淀，然后置4℃冰箱中盐析12h，离心(8000rpm，30min)收集沉淀，获得鼠毒素粗蛋白。
7.如权利要求3至6中任一项所述的方法，其中，将鼠毒素多克隆抗体与亲和配基进行偶联，然后装柱，制备用于分离鼠毒素蛋白的免疫亲和层析柱。
8.如权利要求3至7任一项所述的方法，其中，将鼠毒素粗蛋白溶于PBS中，上亲和层析柱，PBS洗三次，PBS加1.0M NaCL洗一次，最后鼠毒素用0.1M Na2C03/NaHC03(pH 10.5)洗脱；洗脱液用40％饱和硫酸铵沉淀，然后置于4℃冰箱中盐析12h，离心(8000rpm，30min)收集沉淀，获得鼠毒素蛋白。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国人民解放军军事科学院军事医学研究院，未经中国人民解放军军事科学院军事医学研究院许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201810840671.7/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
