[发明专利]一种提取RNA的试剂盒及应用方法

权利要求书

1.一种提取RNA的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下试剂：

核酸提取磁珠、裂解液、蛋白酶K溶液、DNaseⅠ、DNaseⅠBuffer、洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ、洗脱液、组织消化液；

所述裂解液包括：终浓度为1～5mol/L的异硫氰酸胍、终浓度为5～10mmol/L的柠檬酸钠、终浓度为0.5mol/L～2mol/L氯化锂、体积百分比为0.5～5％的Tween-20、体积百分比为0.10％～2％乙酸钾、终浓度为0.05mg～1mg/ml的糖原，终浓度为10mmol/L～100mmol/L的DTT；

所述组织消化液包括：终浓度为10～50mmol/L的Tris-Hcl、终浓度10～20mmol/LCaCl₂，终浓度为10mmol/L～100mmol/L的DTT。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述蛋白酶K溶液，浓度为5～10mg/ml。

3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液Ⅰ包括：终浓度0.1～0.5mol/L异硫氰酸胍、终浓度50～100mmol/L的Tris-HCl、终浓度为5～10mmol/L的EDTA、体积百分比浓度为0.5％～5％的Tween-20、终浓度为0.1～1mol/L的可溶性盐LiCl、终浓度为10mmol/L～100mmol/L的DTT；体积百分比浓度30～80％的异丙醇。

4.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液Ⅱ包括：终浓度为5～20mmol/L的Tris-HCL、体积百分比浓度70～80％的乙醇。

5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述DNaseⅠ浓度为1～3U/μl。

6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述DNaseⅠBuffer包括：终浓度为5～20mmol/L的Tris-HCL、终浓度为10～50mmol/L的MgCl₂，终浓度为0.1～1mmol/L的CaCl₂。

7.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述洗脱液包括：终浓度为5～20mmol/L的Tris-HCL。

8.一种利用权利要求1～7任意一项所述的试剂盒提取RNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将样本于离心管中加入裂解液裂解；

(2)向(1)中裂解后的混合液中加入蛋白酶K溶液；再加入异丙醇吹打混匀；

(3)向(2)所得溶液中加入核酸提取磁珠，混合；

(4)将(3)所得混合液瞬时离心，吸弃液体；

(5)向(4)离心管中加洗涤液Ⅰ进行洗涤，吸弃洗涤液体，晾干；

(6)向(5)离心管中加DNaseⅠ和DNaseⅠBuffer消化；

(7)向(6)离心管中加洗涤液Ⅰ，混合，瞬时离心，吸弃液体；

(8)向(7)离心管中加入洗涤液Ⅱ进行洗涤，吸弃洗涤液体，晾干；

(9)向(8)离心管中加入洗脱液，充分震荡混匀；

(10)将(9)所得混合液瞬时离心，将洗脱液转移至新的离心管中备用。

9.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述RNA提取试剂盒可用于组织、培养细胞或血液样本的RNA提取。