[发明专利]一种提取RNA的试剂盒及应用方法

说明书

本发明属于分子生物学领域，特别涉及一种磁珠法提取核糖核酸(RNA)的试剂盒及提取方法，所述试剂盒包括试剂：组织消化液、裂解液、蛋白酶K、DNase Ⅰ、DNase ⅠBuffer、核酸、提取磁珠、洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ、洗脱液；本发明还公开了利用所述试剂盒提取组织RNA的方法。本发明试剂盒及方法提高了RNA提取产量、纯度、及RNA完整性，同时可实现自动化提取，实现多样本同时进行平行检测，节约人力、时间成本。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，特别涉及一种提取生物组织样本中的核糖核酸(RNA)的试剂盒及提取方法。

背景技术

RNA是以DNA的一条链为模板，以碱基互补配对原则，转录而形成的一条单链，主要功能是实现遗传信息在蛋白质上的表达，是遗传信息向表型转化过程中的桥梁。

RNA提取容易降解，RNA容易降解有内在因素也有外在因素，从自身结构来说RNA是单链分子，本身就很不稳定，另外，RNA分子2’位置上有游离的羟基，易形成2’，3’-环形磷酸盐中间产物，易分解。从外在因素来看，就是RNase无处不在，并且RNase本身热稳定性高、不容易失活，所以在RNA提取过程中，凡是与RNA接触到的器皿都必须是RNase-free的，例如DEPC处理失活RNase、购买RNase-free的实验耗材。

RNA提取最常用的是TRIzol法和离心柱试剂盒法，二者各有优劣，可根据研究目的进行选择。

TRIzol法优点：提取成本低，为最经典常见的RNA提取方法，缺点：操作步骤繁琐、耗时长，提取RNA纯度不高，而且所用试剂大多有毒，对操作人员身体和环境可能造成危害。

试剂法中较常见的过柱法则是结合TRIzol法，加入氯仿分层后取水相RNA过柱提取，较TRIzol法提取RNA纯度高，但是离心等步骤过于繁琐，试剂对操作人员和环境也同样有害。

磁珠法提取RNA,实验过程操作快，加样准确且可以实现自动化提取，但目前国内大多磁珠法提取依然未脱离TRIzol法，与过柱法类似，取加入氯仿分层后的水相，进行核酸吸附。

由此可见，现有技术亟待改善。

发明内容

鉴于此，有必要针对上述问题提供一种磁珠法提取RNA的试剂盒及应用方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种提取RNA的试剂盒，试剂包括：

核酸提取磁珠、裂解液、蛋白酶K溶液、DNaseⅠ、DNaseⅠBuffer、洗涤液Ⅰ、洗涤液Ⅱ、洗脱液；

所述裂解液包括：终浓度为1～5mol/L的异硫氰酸胍、终浓度为5～10mmol/L的柠檬酸钠、终浓度为0.5mol/L～2mol/L氯化锂、体积百分比为0.5～5％的Tween-20、体积百分比为0.10％～2％的乙酸钾、终浓度为0.05mg～1mg/ml的糖原，终浓度为10mmol/L～100mmol/L的DTT；

优选地，所述裂解液包括：终浓度为3mol/L的异硫氰酸胍、终浓度为5mmol/L的柠檬酸钠、终浓度为2mol/L氯化锂、体积百分比为3～5％的Tween-20、终浓度为0.5mg/ml的糖原，终浓度为50mmol/L的DTT；

所述裂解液中LiCl能够促进磁珠对小分子RNA的吸附效果，同时，裂解液中的糖原具有显著的RNA助沉效果，两者共同作用，可以显著提高磁珠提取RNA的产量，尤其是提高了吸附小片段RNA的能力，避免了MicroRNA的损失。

所述裂解液中乙酸钾能够去除样本中多糖组分，有助于得到高纯度RNA。

进一步的，所述试剂盒还包括组织消化液。