[发明专利]一种鲎血血细胞蛋白活性肽的制备方法

说明书

本发明涉及一种鲎血血细胞蛋白活性肽的制备方法，所述制备方法具体包括如下步骤：将鲎血血细胞置于低温‑18℃冷冻12h，4℃融化，反复三次后，在4℃下磁力搅拌10 min，至血细胞破裂；4℃低温离心，速率4000rpm，得到固体沉淀，再用蒸馏水反复冲洗，得到鲎血细胞膜组织；用酶活4000 u/g的胰酶粉酶解鲎血细胞膜组织，酶解条件：pH7.0，60℃～80℃，酶浓度2.2 mg/mL，底物浓度4.0 mg/mL，酶解5h；将酶解液低温离心分离得到上清液，冷冻干燥上清液，获得鲎血血细胞蛋白活性肽。本发明以制备鲎试剂残留的废血细胞膜组织为原料，不仅提高原料利用率、还扩大了鲎血的应用范围，能有效抑制乙酰胆碱酯酶，并有效清除羟自由基，可用于阿尔茨海默病人的治疗和保健。本发明属于天然活性物质提取技术领域。

技术领域

本发明涉及天然活性物质提取技术领域，具体涉及一种鲎血血细胞蛋白活性肽的制备方法。

背景技术

随着人口的老龄化，阿尔茨海默病(AD)的发病率逐年上升，严重危害老年人的身心健康和生活质量，给家庭和社会带来沉重的负担，已成为严重的社会问题，引起各国政府和医学界的普遍关注。阿尔茨海默病(AD)的确切致病机制目前尚未十分清楚，基于“胆减能假说”已开发出的胆碱酯酶抑制剂（多奈呢齐、加兰他敏和利伐司替明）是当前治疗的重要药物，是AD药物治疗的主要手段，用于治疗阿尔兹海默症的药物目前国内也常用石杉碱甲。临床证实这些抑制刻对轻度至中度的患者有效但是对于中重度的疗效不佳，而且伴有一定的副作用以及耐药性等问题。另一方面，本身病情的复杂性，仅针对一种病理现象或靶标设计研发的药物已不能满足广大患者的实际治疗需要。因此寻找和发现具有全新作用机制的治疗药物具有重要的科学意义和应用价值。

研究生物活性肽是当前国际食品界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。其中，鲎血资源珍贵，蛋白含量高，含有人体所必须的8种必须氨基酸以及多种微量元素，存在着多种具有抗菌抗内毒素的小分子活性多肽。而提取鲎血分离变形细胞后剩余的鲎血浆，由于铜含量超出人类食用标准，一般作为废物被丢弃，造成了极大的浪费。因此研究鲎血血细胞蛋白活性肽及其制备方法意义重大。

将鲎血浆制备成活性肽，充分利用了废弃的鲎血浆，又可制备成各种有效药物或保健品，具有较大的推广应用价值。对比文件CN106148465A公开了一种具有抗氧化活性的鲎血浆蛋白水解肽及其制备方法和应用，将鲎血浆于70～100℃条件下恒温水浴2～4小时，然后将鲎血浆抽滤并用水洗涤，备用；使用蛋白酶水解所得鲎血浆，然后将鲎血浆水解液离心分离得上清液备用；将所得上清液过SephadexG-50葡聚糖凝胶柱，收集在波长230nm处吸光度最大的组分即得鲎血浆蛋白水解肽。该方法得到的鲎血蛋白水解肽，具有较高的DPPH自由基清除能力和总抗氧化能力，但没能产生乙酰胆碱酯酶或没能提供对乙酰胆碱酯酶的抑制率实验数据，也没有提供具体的肽得率，因此无法具体实施应用到阿尔茨海默病的药物和保健品或具体的某些药物应用方面。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种鲎血血细胞蛋白活性肽的制备方法，该方法从废弃的鲎血细胞膜组织中制备得到的鲎血血细胞蛋白活性肽，能有效抑制乙酰胆碱酯酶，并有效清除羟自由基，还可作为阿尔茨海默病的药物和保健品，实现了鲎血细胞膜组织的充分利用。

本发明的另一目的在于提供上述制备方法制备得到的鲎血血细胞蛋白活性肽。

一种鲎血血细胞蛋白活性肽的制备方法，所述制备方法具体包括如下步骤：

1. 一种鲎血血细胞蛋白活性肽的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括如下步骤：

S1：将鲎血细胞置于冷冻管，按已设定程序的可程序降温机中每分钟降 1℃～3℃至低温-15℃～-20℃间，冷冻11h～13h，然后至0℃～4℃解冻，完全融化，如此反复冻融三次；

S2：温度保持在0℃～4℃间，将S1所得鲎血血细胞磁力搅拌8min～13min，致鲎血细胞完全破裂；