[发明专利]梅毒螺旋体重组蛋白Tp0971的表达纯化及应用在审
| 申请号： | 201810845528.7 | 申请日： | 2018-07-27 |
| 公开（公告）号： | CN109021082A | 公开（公告）日： | 2018-12-18 |
| 发明（设计）人： | 赵飞骏;张晓红;刘文;赵铁;周成龙;段君霞 | 申请（专利权）人： | 南华大学 |
| 主分类号： | C07K14/20 | 分类号： | C07K14/20;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/571;C12R1/19 |
| 代理公司： | 长沙星耀专利事务所(普通合伙) 43205 | 代理人： | 吴迪 |
| 地址： | 421001 湖*** | 国省代码： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组蛋白 梅毒螺旋体 重组表达质粒 重组融合蛋白 氨基酸序列 基因组DNA 基因连接 梅毒诊断 目的基因 亲和纯化 下游引物 原核质粒 梅毒 灵敏性 双酶切 构建 扩增 镍柱 引物 应用 并用 诊断 转化 | ||
1.梅毒螺旋体重组蛋白Tp0971，其特征在于：所述梅毒螺旋体重组蛋白rTp0971氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述梅毒螺旋体重组蛋白Tp0971用于梅毒的诊断。
2.梅毒螺旋体重组蛋白Tp0971，其特征在于：所述梅毒螺旋体重组蛋白rTp0971氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述梅毒螺旋体重组蛋白Tp0971用于梅毒的判愈。
3.一种权利要求1或2任一项所述的梅毒螺旋体重组蛋白Tp0971的制备方法，其特征在于，包括：以梅毒螺旋体基因组DNA为模板，以上游引物P1：5’CGCGGATCCATGAAGAGGGTGAGTTTGCTC 3’和下游引物P2：5’CCGCTCGAGCTACCACTGAGGCCCCTTC 3’扩增全序列，原核质粒PET30a(+)与目的基因Tp0971双酶切和纯化后，将PET30a(+)载体与Tp0971基因连接，构建重组表达质粒pET30a(﹢)-Tp0971，将其转化到E.coli BL21(DE3)中并用IPTG诱导表达，分别表达出其相应的重组融合蛋白，经镍柱亲和纯化后获得纯化的重组蛋白。
4.一种权利要求1或2任一项所述的梅毒螺旋体重组蛋白Tp0971在制备梅毒诊断试剂中的用途。
5.一种权利要求2或2任一项所述的梅毒螺旋体重组蛋白Tp0971在制备梅毒判愈试剂中的用途。
6.一种用于表达权利要求1或2任一项所述梅毒螺旋体重组蛋白Tp0971的原核表达重组载体，其特征在于所述原核表达重组载体为pET30a(﹢)-Tp0971。
7.一种ELISA试剂盒，所述试剂盒中包括包被液、洗涤液、封闭液、终止液，其特征在于，还包含以下组分：梅毒螺旋体重组蛋白Tp0971，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述ELISA试剂盒用于梅毒的诊断。
8.一种ELISA试剂盒，所述试剂盒中包括包被液、洗涤液、封闭液、终止液，其特征在于，还包含以下组分：梅毒螺旋体重组蛋白Tp0971，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述ELISA试剂盒用于梅毒的判愈。
9.根据权利要求7或8任一项所述的ELISA试剂盒，其特征在于：所述包被液为0.05M的碳酸盐缓冲液，其pH为9.6；所述的洗涤液为含0.05％Tween-20的PBST缓冲液，其pH为7.6，所述封闭液为含5％BSA的PBS缓冲液，所述的终止液为2mol/L的H2SO4溶液。
10.权利要求9所述ELISA试剂盒在制备梅毒诊断试剂和判愈试剂中的应用。
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