[发明专利]一种DNA甲基化定量系统

权利要求书

1.一种DNA甲基化定量系统，其特征在于，包括以下构件：

a)采集构件：所述的采集构件用于采集待测DNA样品的甲基化DNA的量和非甲基化DNA的量；

b)处理构件：所述处理构件采用甲基化/(甲基化+非甲基化)×100计算甲基化百分比参数percent of methylated referenc，PMR；

所述的采集构件包括：

1)转化模块：所述的转化模块用于将DNA样品的非甲基化的胞嘧啶碱基转化为尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶碱基保持不变；

2)扩增模块：所述的扩增模块用于扩增转化后的DNA样品；

所述扩增模块含有至少一对引物和至少一对覆盖待测单个CpG位点的寡核苷探针扩增转化后的DNA样品；

其中，所述的寡核苷酸探针结合MGB；

其中，所述的一对覆盖待测单个CpG位点的寡核苷酸探针，其中一条特异性结合CG序列，另一条特异性结合TG序列；

其中，所述的待测CpG位点位于探针中间靠3’端的区域；

其中，所述的探针5’端靠近正向引物的3’端。

2.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述的系统还含有：

c)输出构件：所述的输出构件用于输出处理构件得到甲基化百分比参数percent ofmethylated referenc，PMR。

3.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述的系统所检测的CpG位点为杂合甲基化区域的CpG位点，或者是侧翼没有CpG的孤立的CpG位点，或者共甲基化区域的CpG位点；或者是非共甲基化区域的CpG位点。

4.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述的系统所检测的CpG位点为CpG岛外的CpG位点，或者是CpG岛内的CpG位点。

5.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述的系统所检测的CpG位点位于基因体、基因间区或启动子。

6.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述的系统所检测的CpG位点为位于基因体或基因间区的CpG open sea、CpG shore、CpG shelf。

7.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述的采集构件不含有完全甲基化标准品。

8.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述的转化模块含有转化剂。

9.根据权利要求8所述的系统，其特征在于，所述的转化剂选自肼盐、重亚硫酸氢盐和亚硫酸氢盐中的一种或几种。

10.根据权利要求8所述的系统，其特征在于，所述的转化剂为亚硫酸氢盐。

11.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述的扩增模块扩增的DNA长度为50～200bp。

12.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述的一对覆盖待测CpG位点的寡核苷酸探针为一对Taqman探针，每条Taqman探针的5’末端连接荧光基团，3’末端连接淬灭剂和MGB基团，且两条Taqman探针5’末端连接的荧光基团具有不同发射光波长。

13.根据权利要求12所述的系统，其特征在于，探针的长度在10～20bp之间。

14.根据权利要求13所述的系统，其特征在于，探针的长度在12～18bp之间。

15.根据权利要求12所述的系统，其特征在于，对于每一条Taqman探针，所述的荧光基团选自FAM、VIC、ROX、TAMRA、SYTO9、JOE/TET/HEX、Texas Red和NED/BODIPY/TMR-X中的一种。