[发明专利]一种幽门螺旋杆菌的深层液体培养方法

权利要求书

1.一种幽门螺旋杆菌的深层液体培养方法，其特征为，包括如下步骤：（1）将布氏肉汤培养基装入三角瓶，三角瓶的橡胶塞上装有带无菌过滤器的进出气管，灭菌后向三角瓶内加入胎牛血清，加入平板培养的幽门螺旋杆菌的菌丝体；（2）通过橡胶塞上的进出气管将三角瓶内的气体用三元气置换，之后于37℃下进行摇床培养，中间换气若干次；（3）将布氏肉汤培养基加入种子罐，灭菌后加入胎牛血清，接入培养好的幽门螺旋杆菌摇瓶培养液，37℃下于三元气保护下培养，控制溶氧大于25%；（4）将培养好的幽门螺旋杆菌种子液转入发酵罐内的布氏肉汤培养基中，加入胎牛血清连续或间歇通入三元气使溶氧维持在25%以上，37℃下培养至耗氧量变缓，放罐，得到产品。

2.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌的深层液体培养方法，其特征在于：步骤（1）、（3）和（4）中，胎牛血清于56℃下保温0.5h进行补体去除，之后再使用。

3.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌的深层液体培养方法，其特征在于：步骤（2）、（3）和（4）中，三元气为体积比为5:15:80的氧气、二氧化碳和氮气的混合气体。

4.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌的深层液体培养方法，其特征在于：步骤（1）中，胎牛血清的添加量为布氏肉汤培养基质量的8-12%，幽门杆菌的接种量为1-2个平板/200mL培养液。

5.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌的深层液体培养方法，其特征在于：步骤（3）中，种子罐中培养液的OD600值为0.1-0.3，胎牛血清的添加量为培养液质量的4-8%，接种量为5-10%。

6.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌的深层液体培养方法，其特征在于：步骤（4）中，发酵罐中培养液的OD600值为0.2-0.6，胎牛血清的添加量为培养液质量的0-4%，接种量为1-5%。

7.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌的深层液体培养方法，其特征在于：步骤（3）的种子罐和步骤（4）的发酵罐中，溶氧零点值标定为1%，标定条件为121℃灭菌保压阶段。

8.根据权利要求1所述的幽门螺旋杆菌的深层液体培养方法，其特征在于：步骤（3）的种子罐和步骤（4）的发酵罐中，斜率值标定条件为灭菌后降温至37℃，吹干滤芯，用三元气置换种子罐或发酵罐内的空气，保持罐压0.05MPa，至溶氧显示值2-5分钟内跳动幅度小于2%。