[发明专利]一种鉴定木聚糖酶蛋白条带及活性的酶谱方法

权利要求书

1.一种鉴定木聚糖酶蛋白条带及活性的酶谱方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤(1)制备待测定的木聚糖酶液样品；

步骤(2)制备分离胶层，再在分离胶上层上制备具有样品槽的浓缩胶层；

步骤(3)将步骤(2)制备的胶放在垂直电泳槽中并加满Tris-甘氨酸缓冲液，再在浓缩胶层的样品槽中点样后，对所述垂直电泳槽施加电压，跑胶，直至木聚糖酶液样品中的溴酚蓝条带跑至垂直电泳槽的底层为止；

步骤(4)利用割胶板将木聚糖酶液样品所在泳道的胶切成条状，去除浓缩胶层，保留分离胶层，即获得包含样品的条状分离胶；将所述包含样品的条状分离胶，放入乙酸钠溶液中，孵育20-50分钟；

步骤(5)将步骤(4)中孵育后的所述包含样品的条状分离胶紧密贴在培养皿的底物胶的胶面上，将培养皿放置在30-50℃的生化培养箱中，培养1-36小时，直至有清晰的条带和透明圈出现；所述底物胶由雷马素亮蓝R交联木聚糖、琼脂粉及pH2.0-8.0的乙酸钠缓冲液制成；

步骤(1)中所述木聚糖酶液样品包括木聚糖酶与上样缓冲液，所述木聚糖酶液的浓度为30-150微克/毫升，所述木聚糖酶液与上样缓冲液按体积比为1：1-2：1混合；所述上样缓冲液包括0.5MTris-Hcl缓冲液、甘油、0.5％溴酚蓝及蒸馏水；

所述上样缓冲液的制备：将1.25毫升0.5MTris-Hcl缓冲液，3毫升甘油，2毫升0.5％溴酚蓝，5.5毫升蒸馏水，混合均匀，即可获得上样缓冲液。

2.根据权利要求1所述的一种鉴定木聚糖酶蛋白条带及活性的酶谱方法，其特征在于，步骤(5)中所述底物胶的制备步骤：称取10-100毫克雷马素亮蓝R交联木聚糖，0.15-0.6克琼脂粉，放入30-50毫升pH为2.0-8.0的乙酸钠缓冲液中，电炉上加热溶解，冷却至30-50℃，倒入培养皿中，放置于桌面上，直至冷却凝固，即获得底物胶。

3.根据权利要求1所述的一种鉴定木聚糖酶蛋白条带及活性的酶谱方法，其特征在于，步骤(2)中的分离胶由蒸馏水、30％丙烯酰胺、1.5MTris-Hcl缓冲液、10％过硫酸铵、四乙基乙二胺原液制成；所述蒸馏水、30％丙烯酰胺、1.5MTris-Hcl缓冲液、10％过硫酸铵、四乙基乙二胺原液的体积比为(1.60-1.70)：(1.8-2.1)：(1.2-1.4)：(0.02-0.07)：(0.003-0.005)。

4.根据权利要求1所述的一种鉴定木聚糖酶蛋白条带及活性的酶谱方法，其特征在于，步骤(2)中的浓缩胶由蒸馏水、30％丙烯酰胺、0.5MTris-Hcl缓冲液、10％过硫酸铵、四乙基乙二胺原液制成；所述蒸馏水、30％丙烯酰胺、0.5MTris-Hcl缓冲液、10％过硫酸铵、四乙基乙二胺原液的体积比为(2.0-2.2)：(0.4-0.7)：(0.35-0.4)：(0.02-0.04)：(0.002-0.004)。

5.根据权利要求1所述的一种鉴定木聚糖酶蛋白条带及活性的酶谱方法，其特征在于，步骤(3)中的跑胶步骤为：将步骤(1)中制备的木聚糖酶液样品，加入到样品槽中，调节电压为80v，开始跑胶，二十分钟后，将电压调为120v。