[发明专利]重组大肠杆菌zjut-ho1及其在制备胆绿素中的应用

权利要求书

1.一种重组大肠杆菌（Escherichia coli）zjut-ho1在生物转化血红素制备胆绿素中的应用，其特征在于所述的应用以重组大肠杆菌zjut-ho1经诱导培养获得的培养液为反应介质，以氯化血红素为底物构成反应体系，于37℃、180 r/min恒温振荡摇床中培养5h至转化完全，将反应液分离纯化，获得胆绿素；所述培养液OD₆₀₀=1.40~1.65，所述底物在培养液中的终浓度为200 mg/L；

重组大肠杆菌zjut-ho1，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号：GDMCC No:60372，保藏日期2018年5月18日，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510075；

所述重组大肠杆菌zjut-ho1诱导培养方法为：

（1）将重组大肠杆菌zjut-ho1接种于含50 μg/mL卡那霉素的LB斜面培养基，于37℃恒温培养24 h，获得斜面菌体；所述的LB斜面培养基终浓度组成为：酵母浸出粉5 g/L，蛋白胨10 g/L，NaCl 10 g/L，琼脂 20 g/L，溶剂为去离子水，pH 7.4；

（2）挑取斜面菌体2环，接种到含50 μg/mL卡那霉素的LB液体培养基，于30℃、180 r/min的恒温振荡摇床培养12 h，获得种子液；所述的LB液体培养基终浓度组成为：酵母浸出粉5 g/L，蛋白胨10 g/L，NaCl 10 g/L，溶剂为去离子水，pH 7.4；

（3）按体积浓度3%的接种量，将步骤（2）种子液接种至含50 μg/mL卡那霉素的甘油培养基，37℃、180 r/min培养至菌浓OD₆₀₀=0.8±0.3时，加入终浓度为0.5 mmol/L的IPTG，30℃、100 r/min培养至OD₆₀₀=1.40~1.65，获得培养液；所述的甘油培养基终浓度组成为：甘油20g/L，酵母浸出粉20 g/L，(NH₄)₂SO₄ 5 g/L，NaCl5 g/L，Na₂HPO₄ 15 g/L，KH₂PO₄ 3 g/L，MgSO₄0.5 g/L，溶剂为去离子水，pH自然。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述氯化血红素以2 g/L氯化血红素水溶液的形式加入，所述2 g/L氯化血红素水溶液的配制方法为：100 mg氯化血红素微热溶解50 mL质量浓度0.25% Na₂CO₃水溶液，即得2 g/L的氯化血红素水溶液。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述反应液分离纯化的方法为：反应结束后，将反应液经1000 g离心10 min，收集菌体，菌体用等同反应体系体积的酸性甲醇悬浮，于40℃、100 KHz、200 W条件下超声30 min，1000 g离心5 min，收集上清液；上清液于45℃下减压蒸干后，加入原反应体系1/4～1/5体积的酸性甲醇溶解残留物，用滤纸过滤后，于45℃下减压干燥，即得胆绿素；所述的酸性甲醇是在体积浓度95%甲醇水溶液中，加入1/1000体积比的质量浓度36%浓盐酸制成。