[发明专利]曲霉菌株及利用曲霉菌株发酵生产人乳铁蛋白的方法

说明书

本发明公开了一种曲霉菌株及利用曲霉菌株发酵生产人乳铁蛋白的方法。所述曲霉菌株为泡盛曲霉菌株(Aspergillus sp)KS‑11‑08，所述菌株保藏编号为CGMCC No：15674。所述方法包括：将所述菌株进行培养，得到种子液；将所述种子液进行发酵；得到含有重组人乳铁蛋白的发酵液。本发明提供的泡盛曲霉菌株KS‑11‑08把重组人乳铁蛋白基因序列转入曲霉菌株，并在曲霉菌中得到正常表达。在所述发酵过程中，添加诱导物的情况下，转入的重组人乳铁蛋白基因在诱导物的作用下得到高效表达，显著提高了人乳铁蛋白的发酵产量，培养方法简单，原料来源丰富，且价格低廉，经济效益高，微生物生长繁殖快，生长周期短，产量高，可进行大规模生产。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种曲霉菌株及利用曲霉菌株发酵生产人乳铁蛋白的方法。

背景技术

人乳铁蛋白具有广泛复杂的生物学功能，其脱铁形式是一种多功能的免疫调节物质，是人体非特异性黏膜免疫系统中重要的非抗体保护蛋白，在抗感染抗炎症的第一线发挥作用；铁饱和的形式则主要作为人体生物利用度最高的铁源，用以调节机体铁代谢。当前，国内外对人乳铁蛋白理论及应用的研究都非常重视，开发应用前景十分广阔,可产生巨大的社会和经济效益。特别是其广谱而独特的抗微生物活性，已使之成为抗菌、抗病毒类新药设计的重要候选物。由于自然状态下人乳铁蛋白含量稀少，且从人乳中纯化成本极高，利用基因工程技术制备是实现产业化生产唯一的途径。

近年来，国内外已有利用转基因技术在动物乳腺中生产重组人乳铁蛋白方法的报道，但目前人们还未完全掌握人乳铁蛋白基因表达控制的规律、对导入的目的基因对宿主染色体和目的基因本身的影响以及整合的详细机理。同时，转基因动物的成功率低，目的蛋白的表达水平远低于乳汁中总蛋白含量，且目的基因的分离、改造、载体构件、体细胞克隆等技术不够成熟。另外，动物的自身机体保护系统会产生对外源性物质产生排斥反应，如产生蛋白质水解，糖基化形式与人类不同，对产品的安全性构成了极大的威胁。因此，如何利用基因技术安全高效的生产人乳铁蛋白是一项亟待解决的技术问题。

发明内容

鉴于上述现有技术方法的缺陷，本发明提供了一种曲霉菌株，及利用曲霉菌株发酵实现的安全高效、适于高密度培养的人乳铁蛋白的生产方法。

本发明一方面提供了一种曲霉菌株：泡盛曲霉菌株(Aspergillus sp) KS-11-08，所述菌株保藏编号为CGMCC No.15674；保藏日期为2018年5月 7日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明另一方面提供了一种利用曲霉菌株发酵生产人乳铁蛋白的方法，包括：

将所述菌株进行培养，得到种子液；

将上述种子液进行发酵；

得到含有重组人乳铁蛋白的发酵液。

在一种优选实施例中，所述曲霉菌株为泡盛曲霉菌株(Aspergillus sp) KS-11-08，所述菌株保藏编号为CGMCC No.15674；保藏日期为2018年5月 7日，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

在一种优选实施例中，所述曲霉菌株可以先接种于斜面培养基，培养得到成熟的菌种，然后将得到的菌种接种于液体种子培养基进行培养。

在一种优选实施例中，所述曲霉菌株接种于斜面培养基之后得到的一级菌种，所得一级菌种可以继续接种于固体培养基培养，得到二级或三级菌种，所述一、二、三级菌种均可接种至液体种子液培养基进行培养。

优选地，所述斜面培养基包括碳水化合物、含氮物质、无机盐、微量元素、维生素和水。