[发明专利]一种检测花生黑腐病菌的LAMP引物组及其快速检测方法和试剂盒

权利要求书

1.一种检测花生黑腐病菌的LAMP引物组，其特征在于，所述引物组包括一对外引物F3/B3和一对内引物FIP/BIP；其核苷酸序列分别依次如SEQ ID NO：2～SEQ ID NO：5所示。

2.权利要求1所述的LAMP引物组在花生黑腐病菌快速检测或在制备花生黑腐病菌快速检测试剂盒中的应用。

3.一种检测花生黑腐病菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.提取待测样品总DNA；

S2.以S1所述DNA为模板，利用权利要求1所述LAMP引物组进行LAMP扩增反应；

S3.根据扩增结果判断待测样品中是否含有花生黑腐病菌。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，S1所述LAMP扩增反应的体系为：10×buffer 2.5 μL，8 U Bst DNA聚合酶0.5 μL，10 mmol/L dNTPs 2.5 μL，5 mol/L甜菜碱2.0μL，100 mmol/L Mg ²⁺ 1.0μL，10 μmol/L外引物FIP/BIP 4.0 μL，10 μmol/L内引物F3/B30.5 μL，DNA模板1 μL，ddH₂O补至25 μL。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，S1所述LAMP扩增反应的条件为：63～67℃温育30～80 min，80℃保温5 min。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，S2所述根据扩增结果判断待测样品中是否含有花生黑腐病菌的具体方法为：利用电泳法或荧光染料法对LAMP扩增产物进行检测，根据检测结果判断待测样品中是否含有花生黑腐病菌。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述荧光染料法为将染料SYBR Green I加入到LAMP扩增产物中，观察显示的颜色，若呈现黄绿色则为阳性，表示待测样品中含有花生黑腐病菌；若呈现橙色，则为阴性，表待测样品中不含有花生黑腐病菌。

8.一种用于检测花生黑腐病菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1所述LAMP引物组。