[发明专利]一种从禽蛋同时高效提取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺多残留的方法

权利要求书

1.一种从禽蛋同时高效提取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺多残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)禽蛋样品提取与净化：

采用97:2:1，V/V的甲醇:氨水:水溶液为提取剂，加速溶剂萃取ASE技术提取，离心浓缩仪蒸发浓缩，正己烷手动去脂；

2)液相色谱-串联质谱检测；液相色谱-串联质谱检测的步骤中，

a.液相色谱条件

色谱柱为Waters ACQUITY UPLC BEH C18；流动相：A相为2mM乙酸铵-水溶液，B相为2mM乙酸铵-乙腈溶液；流速：0.2mL/min；设置特定的梯度洗脱程序；

b.质谱条件

离子源：电喷雾离子源ESI；扫描方式：正离子扫描FFA和负离子扫描CAP、TAP、FF和d5-CAP；检测方式：多反应监测MRM；电喷雾离子化电压IS：5000～5500V正离子扫描、4000～4500V负离子扫描；离子源温度TEM：450～500℃；离子源喷雾气Gas1:40～45psi正离子扫描、45～50psi负离子扫描；辅助加热气Gas2：45～50psi正离子扫描、35～40psi负离子扫描；气帘气CUR：12～15psi正离子扫描、16～20psi负离子扫描；碰撞气CAD：6～8psi；碰撞室出口电压CXP：5～6V正离子扫描、7～8V负离子扫描；射入电压EP：6.5～7.5V正离子扫描、11～13V负离子扫描；每个定量离子对驻留时间：100.0ms，每个定性离子对驻留时间：100.0ms；

在b.质谱条件中，CAP、TAP、FF、FFA和d5-CAP的保留时间和其它质谱参数如下：

注：^*定量离子对；

在a.液相色谱条件中，所述特定的梯度洗脱程序如下：

分离禽蛋中CAP、TAP、FF、FFA和d₅-CAP的梯度洗脱程序

步骤(1)具体为：准确称取均质好的禽蛋空白样品放于研钵中，并加入硅藻土研磨，装入萃取池中，用ASE进行萃取；在1500psi，80℃萃取条件下，每个萃取池用甲醇:氨水:水溶液以97:2:1，V/V的比例静态萃取1次，静态萃取时间5min，氮气吹扫60s，收集萃取液待用；将上述萃取收集的萃取液转移至离心管，蒸发浓缩；萃取液蒸发浓缩后，加入纯乙腈，漩涡振荡混匀，加入正己烷漩涡混匀，去脂，静置，弃去上层正己烷，下层提取液重复提取一次，然后吹干，待用。

2.根据权利要求1所述的一种从禽蛋同时高效提取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺多残留的方法，其特征在于，在a.液相色谱条件中，色谱柱：WatersACQUITY UPLC BEH C18，2.1×50mm，1.7μm；保护柱：Waters VanGuardTM BEH C18，1.7μm。

3.根据权利要求1所述的一种从禽蛋同时高效提取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺多残留的方法，其特征在于，在a.液相色谱条件中，进样体积：10μL；柱温25～30℃。