[发明专利]一种从禽蛋同时高效提取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺多残留的方法

说明书

本发明涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种从禽蛋同时高效提取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺多残留的方法，包括如下步骤：禽蛋样品提取与净化：采用97:2:1，V/V的甲醇:氨水:水溶液为提取剂，加速溶剂萃取ASE技术提取，离心浓缩仪蒸发浓缩，正己烷手动去脂；液相色谱‑串联质谱检测。本发明选择了甲醇:氨水:超纯水（97:2:1，V/V）作为提取剂，加速溶剂萃取法同时提取禽蛋中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺多残留。氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺在禽蛋中添加浓度分别为LOQ、0.5MRL、1.0MRL、2.0MRL的提取回收率分别大于或等于90.31%、93.40%、92.32%和92.35%，满足兽药残留检测方法的需求。

技术领域

本发明涉及兽药残留检测领域，具体涉及一种用加速溶剂萃取仪从禽蛋中同时高效提取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺多残留的方法。

背景技术

在对动物源性食品中的兽药进行检测时，只有将药物从样本中提取出来，才可能建立起高效的检测方法。纯品氯霉素为中性的白色或微带黄绿色针状、长片状结晶或结晶性粉末，味极苦，性质稳定，熔点为149～15l℃。微溶于水，稍溶于乙二醚，不溶于苯及石油醚，但易溶于甲醇、乙醇、丙二醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂中，在乙醇中的溶解度可达400mg/mL。甲砜霉素为白色结晶性粉末，无臭。在二甲基甲酰胺中易溶，微溶于水，溶于甲醇，几乎不溶于乙醚或氯仿。氟苯尼考为白色或类白色的结晶性粉末，无臭，在二甲基甲酰胺中极易溶解，在甲醇中溶解，在冰醋酸中略溶，在水或氯仿中极微溶解。0.5％水溶液的pH值为4.5～6.5，最大吸收波长为224nm，与甲砜霉素相同。氟苯尼考胺为氟苯尼考在机体内的主要代谢产物。国内外关于动物源性食品中提取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺多残留的方法主要为液-液萃取法、固相萃取法，一般提取剂为碱性乙酸乙酯和碱性乙酸乙酯-乙腈溶液。但目前为止，采用加速溶剂萃取技术同时提取禽蛋中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺多残留的方法在国内外尚未见报道。加速溶剂萃取技术具有溶剂用量少、萃取速度快、效率高、回收率高、重现性好和自动化程度高等优势被广泛应用在兽药残留分析领域。氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺化学性质稳定适合加速溶剂萃取，同时相比液-液萃取法，可以避免手动萃取带来的误差和重现性差等问题，耗时短，适合批量处理样品。因此，本发明采用加速溶剂萃取技术同时高效提取禽蛋中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺残留。

发明内容

为了解决提取禽蛋中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺回收率低的问题,本发明提供一种用加速溶剂萃取仪从禽蛋中同时高效提取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺多残留的方法，可以避免手动萃取带来的误差和重现性差等问题，耗时短，适合批量处理样品。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：一种从禽蛋同时高效提取氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺多残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)禽蛋样品提取与净化：

采用97:2:1，V/V的甲醇:氨水:水溶液为提取剂，加速溶剂萃取ASE技术提取，离心浓缩仪蒸发浓缩，正己烷手动去脂；

具体地，步骤(1)的具体过程为：准确称取均质好的禽蛋空白样品放于研钵中，并加入硅藻土研磨，装入萃取池中，用ASE进行萃取；在1500psi，80℃萃取条件下，每个萃取池用甲醇:氨水:水溶液以97:2:1，V/V的比例静态萃取1次，静态萃取时间5min，氮气吹扫60s，收集萃取液待用；将上述萃取收集的萃取液转移至离心管，蒸发浓缩；萃取液蒸发浓缩后，加入纯乙腈，漩涡振荡混匀，加入正己烷漩涡混匀，去脂，静置，弃去上层正己烷，下层提取液重复提取一次，然后置于氮吹仪上吹干，待用；

2)液相色谱-串联质谱检测。

液相色谱-串联质谱检测的步骤中，

a.液相色谱条件